[发明专利]基于雄激素受体识别元件和G-四链体杂交链式放大反应检测雄激素受体的电化学方法

摘要

基于雄激素受体识别元件和G‑四链体杂交链式放大反应检测雄激素受体的电化学方法，属于分析化学和临床诊断技术领域。本发明利用雄激素受体(AR)对雄激素受体识别元件(ARE)的保护作用，当AR存在时与具有特定序列的双链DNA即ARE结合，同时借助杂交链式放大反应通过序列互补将大量G‑四链体结构聚集到固定在电极表面的含有ARE的DNA探针上。最后利用电极表面结合的具有氧化还原活性的G‑四链体‑血红素复合物与AR浓度呈正相关，通过电流值与AR浓度间的线性关系实现对AR的定量分析。该方法具有灵敏度高、专一性好等优点，并适用于对人血清等临床样本中AR浓度的定量分析。

主权项

1.基于雄激素受体识别元件和G‑四链体杂交链式放大反应检测雄激素受体的电化学方法，其特征在于：合理设计了两条具有特定序列的单链DNA探针P1和P2，用以构建雄激素受体AR结合探针ARBP；P1的5’端序列和P2的3’端序列互补，其杂交后形成一端为序列互补的双链DNA，其中包含雄激素受体识别元件ARE，并在末端带有巯基修饰，另一端为非互补的能够引发G‑四链体杂交链式放大反应的单链末端区；通过自组装将ARBP的双链端以Au‑S键固定至金电极表面，形成探针修饰的电极；利用AR与ARBP中ARE部分的特异性识别和结合屏蔽住ARBP本身含有的限制性内切酶NspI的酶切位点，避免NspI对ARBP的切割；在G‑四链体杂交链式放大反应中，合理设计了四段G‑四链体形成探针 Hp1、Hp2、Hp3和Hp4，Hp1和Hp2、Hp3和Hp4两两互补配对，不断自发地在ARBP的单链端形成两段具有极多数量G‑四链体结构的杂交链，与血红素结合形成具有氧化还原活性的G‑四链体‑血红素复合物，其数量与AR的浓度密切相关；最后通过差分脉冲伏安法DPV测定峰电流值与AR浓度间的线性关系建立标准曲线；以同样的步骤和试剂对待测血清样品中的AR进行检测。