[发明专利]一种快速冻存和复苏子宫内膜干细胞的方法

摘要

本发明提供了一种快速冻存和复苏子宫内膜干细胞的方法，可以降低细胞受损凋亡的概率、提高存活率；向细胞中加入冷冻保存液或复苏保护液后进行短时间低频超声处理，可以在不破坏细胞结构的前提下使相互粘附的细胞发生轻微松动、产生缝隙，并能使液体分散成小液滴、便于渗入细胞之间；细胞粘附分子可以促进细胞之间相互粘附，从而进一步减少单个细胞、提高细胞的存活率；细胞活性抑制剂可以对细胞内的一些生理活动进行可逆的抑制，在不影响细胞活性的前提下提高冻存效果。通过上述手段，可以降低冷冻过程和复苏过程对细胞造成的物理性和化学性的伤害，从而提高细胞存活率和冻存的复苏率。

主权项

1.一种快速冻存和复苏子宫内膜干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：提取子宫内膜组织，贴壁培养36h～48h，并对得到的细胞进行传代培养6～8d；S2：将步骤S1得到的传代细胞置于DMEM培养基中，加入预冷至2～5℃的冻存保护液，轻轻振荡混匀，短时间低频超声处理，所述冻存保护液中添加有至少一种细胞粘附分子以及至少一种细胞活性抑制剂；S3：将步骤S2得到的细胞混合液置于液氮中，降温至‑196℃下保存；S4：将冻存的细胞取出，首先快速升温至30～40℃，然后迅速降温至2～10℃，重复上述过程3次；取出后用PBS缓冲液洗涤2～4次，离心、弃去洗涤液；S5：向步骤S4得到的细胞中加入预冷至2～5℃的与冻存保护液等体积的复苏保存液，短时间低速超声处理，得到细胞悬液，所述复苏保存液中添加有至少一种细胞粘附解除分子以及至少一种细胞活性激活剂。