[发明专利]基于液质联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法

摘要

本发明公开了一种基于液质联用技术分析蛋白‑多糖复合体消化率的方法。所述方法为：将蛋白溶液以及蛋白‑多糖复合体溶液在模拟胃液中体外消化；接着对消化后的蛋白以及蛋白‑多糖复合体变性处理、用超滤管去掉低分子量多肽碎片，截留在超滤管中的大片段多肽使用除胃蛋白酶之外第二种酶切位点明确的内切蛋白酶进一步完全水解，得到若干多肽片段；最后使用液相色谱‑质谱联用技术检测多肽的组成和丰度。根据第二种蛋白酶切和胃蛋白酶切肽段的多肽丰度，确定胃蛋白酶消化率。进一步根据两种肽段中蛋白‑多糖复合体组别中高丰度的多肽推断蛋白和多糖的结合位点。

主权项

1.一种基于液质联用技术分析蛋白‑多糖复合体消化率的方法，该方法为：步骤1，配制蛋白溶液和多糖溶液，将多糖溶液和蛋白溶液混合，调节pH值至2‑6之间，得到蛋白‑多糖复合体溶液；步骤2，配制模拟胃液，对前述配制的蛋白溶液以及蛋白‑多糖复合体溶液进行消化；步骤3，经模拟胃液消化后的蛋白溶液组以及蛋白‑多糖复合体溶液组，分别加入蛋白变性剂进行变性处理，然后采用除胃蛋白酶外的第二种蛋白酶分别进一步水解所述蛋白溶液组以及蛋白‑多糖复合体溶液组，得到若干多肽片段；步骤4，采用液相色谱‑质谱联用分析前述水解后获得的若干多肽片段，根据蛋白数据库中乳清蛋白所包含的各种蛋白质的序列数据，获得所述多肽片段的质谱响应强度和序列信息；步骤5，分别将蛋白‑多糖复合体溶液组以及蛋白溶液组获得的多肽片段的质谱响应强度相除后取以2为底的对数作为定量数值，每组重复三次实验并进行双样本t检验，并将FDR 0.05，定为确定两组显著性差异的阈值；对每条多肽而言，其定量数值大于等于1，同时p值小于0.05，则蛋白‑多糖复合体溶液组中的二次水解肽段显著多于蛋白溶液组；定量数值小于等于‑1，同时p值小于0.05，则蛋白‑多糖复合体溶液组中的二次水解肽段显著少于蛋白溶液组；若定量数值小于1且大于‑1，则该肽段在不同组别无显著性差异。