[发明专利]连续应用亲和层析和陶瓷羟基磷灰石层析分离抗体药物的方法在审
| 申请号： | 201811194791.0 | 申请日： | 2018-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN109438572A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 陆容;陈俏梅;王卓智;李竞;陈智胜 | 申请（专利权）人： | 上海药明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K1/22 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 郑权 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区自由*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开一种连续应用亲和层析和陶瓷羟基磷灰石层析分离抗体药物的方法，包括步骤：1)向经过亲和层析纯化之后的抗体溶液中加入磷酸钠缓冲盐至终浓度为5‑15mM，用Tris‑base调节抗体溶液的pH为6.7～6.9，用NaCl调节抗体溶液的电导率为5～7mS/cm；2)将步骤1)得到的抗体溶液采用陶瓷羟基磷灰石层析；陶瓷羟基磷灰石层析的步骤为：a、处理亲和填料，上样；b、使用淋洗2缓冲液淋洗柱层析；淋洗2缓冲液为体积分数10％的Buffer‑B；c、洗脱，先使用Buffer‑B梯度洗脱，再使用100％Buffer‑B洗脱。本发明的方法，可以连用亲和层析，进行两步纯化，简化了蛋白的纯化流程，降低了成本，极大的缩短时间；还具有分辨率高的特点，可将蛋白的纯度提高到90％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 陶瓷羟基磷灰石 抗体溶液 亲和层析 层析 层析分离 抗体药物 缓冲液 淋洗 洗脱 蛋白 磷酸钠缓冲盐 亲和层析纯化 电导率 两步纯化 亲和填料 梯度洗脱 体积分数 分辨率 淋洗柱 再使用 上样 应用 | ||
【主权项】：
1.一种连续应用亲和层析和陶瓷羟基磷灰石层析分离抗体药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)向经过亲和层析纯化之后的抗体溶液中加入磷酸钠缓冲盐至终浓度为5‑15mM，用Tris‑base调节抗体溶液的pH为6.7～6.9，用NaCl调节抗体溶液的电导率为5～7mS/cm；2)将步骤1)得到的抗体溶液采用陶瓷羟基磷灰石层析；所述陶瓷羟基磷灰石层析的步骤为：a、处理亲和填料，上样；b、淋洗，使用淋洗2缓冲液淋洗柱层析；所述淋洗2缓冲液为体积分数10％的Buffer‑B+90％Buffer‑A；所述Buffer‑B为10mM磷酸钠缓冲盐、1M氯化钠、pH 6.8的溶液；所述Buffer‑A为10mM磷酸钠缓冲盐、30mM氯化钠、pH 6.8的溶液；c、洗脱，先使用Buffer‑B+Buffer‑A的溶剂体系进行梯度洗脱，Buffer‑B体积分数由10％梯度升高至90％，Buffer‑A体积分数由90％梯度降低至10％；再使用100％Buffer‑B洗脱，收集产品。
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