[发明专利]一种用于质谱流式技术的检测方法

摘要

本发明公开了一种用于质谱流式技术的检测方法，主要包括固定、Barcode、封闭、胞外染色、通透、胞内染色等步骤。具有通量大，准确度高，操作简便，节约试剂，且降低了实验过程中人为因素的误差。通过对细胞固定，Barcode等关键技术细节进行优选限定，建立了稳定规范的技术流程。该方法大大提高了样本单次实验可以检测标志物的数量，传统方法需要多次才能完成的染色操作，现在将不同Barcode样品混在一起，一次性完成染色，高效的对单细胞进行多参数分析，以最少的细胞数，产出了最大的数据量。在提高样本信息量的同时，既节约了珍贵的生物样本，又去除了管间变异，并且简化了工作流程，大幅缩短手动操作时间。

主权项

1.一种用于质谱流式技术的检测方法，包括以下步骤：a.取待检测的细胞至EP管中，离心洗涤细胞，弃上清；b.区分细胞死活：加入染死活试剂，4℃孵育5分钟；c.洗涤：加入流式缓冲液重悬细胞，离心洗涤细胞，弃上清；d.固定：加入固定液重悬细胞，室温孵育10分钟；e.洗涤：加入流式缓冲液重悬细胞，离心洗涤细胞，弃上清；f.用冻存液重悬细胞，转移至冻存管中，放入梯度冻存盒中，‑80℃冰箱保存；g.复苏细胞：从‑80℃冰箱取出后复苏细胞；h.将细胞转入EP管中，流式缓冲液离心洗涤细胞，弃上清；i.Barcode：配置Barcode mix，每个EP管的样品加入一种Barcoding mix重悬细胞，各样品中所加Barcoding mix各不相同；j.洗涤：加入流式缓冲液重悬细胞后，离心洗涤细胞，弃上清；k.将不同样品混在一起后，离心洗涤细胞，弃上清；l.封闭：加入封闭液后，4℃孵育20分钟；m.胞外染色：加入细胞表面抗原的金属标记抗体，4℃孵育30分钟；n.洗涤：加入流式缓冲液，离心洗涤细胞，弃上清；o.配置固定试剂，固定染DNA，放入4℃冰箱过夜；p.洗涤：加入通透液，离心洗涤细胞，弃上清；q.重悬：加入Foxp3buffer重悬细胞，室温孵育20分钟；r.洗涤：加入通透液，离心洗涤细胞，弃上清；s.胞内染色：加入胞内抗原的金属标记抗体，4℃孵育30分钟；t.洗涤：加入流式缓冲液，离心洗涤细胞，弃上清；u.上机：用双蒸水洗涤后将样品放入质谱细胞仪中进行检测并分析。