[发明专利]一种生产维生素B2的发酵方法

摘要

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种生产维生素B2的发酵方法。该种生产维生素B2的发酵方法，包括斜面培养、母瓶培养、一级种子培养、二级种子培养和三级发酵培养过程。本发明的一种生产维生素B2的发酵方法，采用枯草芽孢杆菌发酵生产维生素B2，优化了维生素B2发酵的具体操作方法，建立了工艺调控的标准，通过检测发酵过程中菌浓变化，以菌浓剧变作为判断工艺参数调整的时间及幅度的依据，使维生素B2发酵水平有了大幅度的提升，生产水平稳定，降低发酵成本。

主权项

1.一种生产维生素B2的发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：斜面培养：将枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基，于35‑37℃培养箱内培养46‑50h；母瓶培养：从步骤（1）培养完成的斜面培养基上刮取两环菌接种于摇瓶中，摇瓶内液体培养基100ml，培养条件为转速200‑220rpm，温度36.5‑38℃，培养周期24‑25h；一级种子培养：待步骤（2）中摇瓶中OD值净增10‑14时，按接种量0.8‑1.2%接入一级种子罐培养，一级种子罐内含种子培养基，培养条件为罐压0.03‑0.05Mpa，vvm0.6‑0.8，罐温为36‑36.5℃，转速150‑180rpm，培养周期20‑22h；二级种子培养：待步骤（3）中一级种子OD值净增10‑14时，按接种量6‑10%接入二级种子罐中培养，二级种子罐内含种子培养基，二级种子罐培养条件为罐压0.03‑0.05Mpa，vvm0.6‑1.0，罐温为36‑36.5℃，转速160‑200rpm，培养周期18‑20h；三级发酵培养：待步骤（4）中二级种子OD值净增6‑8时按接种量为6‑10％接入三级发酵罐中，三级发酵罐中含发酵培养基，三级发酵罐初始培养条件为0.03‑0.035Mpa，转速60‑70rpm，vvm0.6‑0.65，罐温36‑36.5℃，初始糖浓度25‑30g/L，磷浓度0.3‑0.4g/L，氨氮浓度160‑200mg/L，接种后每隔4个小时取样测葡萄糖含量、氨氮含量、OD、pH并镜检观察菌型，整个发酵过程中，葡萄糖通过调节流加补料量将含量控制在9‑11g/L，整个发酵过程通过补加液氨稳定控制PH；前期OD值≤20时，pH控制6.6‑6.8，温度36‑36.5℃；中期OD值为20‑120时，pH控制6.9‑7.0，温度37‑38℃；后期至发酵结束控制pH7.1‑7.2，温度38.5‑39.5℃；待发酵罐中出现芽孢，且单位每4小时增长幅度≤1000mg/L时，停止发酵。