[发明专利]一种生产维生素B2的发酵方法

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种生产维生素B2的发酵方法。该种生产维生素B2的发酵方法，包括斜面培养、母瓶培养、一级种子培养、二级种子培养和三级发酵培养过程。本发明的一种生产维生素B2的发酵方法，采用枯草芽孢杆菌发酵生产维生素B2，优化了维生素B2发酵的具体操作方法，建立了工艺调控的标准，通过检测发酵过程中菌浓变化，以菌浓剧变作为判断工艺参数调整的时间及幅度的依据，使维生素B2发酵水平有了大幅度的提升，生产水平稳定，降低发酵成本。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种生产维生素B2的发酵方法。

背景技术

维生素B2，又称核黄素，为黄色或橙黄色结晶粉末，味微苦，是人体所需的一种特殊营养成分，在人体代谢过程中起到重要作用。它作为辅酶FMN和FAD以及共价结合的黄素的前体，是能量产生的中心环节，并且参与体内药物代谢和脂质代谢。当它缺乏时，表现出症状为虚弱、疲倦、口疼和触痛、眼发烧和痒，进一步缺乏可能导致唇裂、口角炎、皮炎、贫血和脑功能失调等。

目前，工业上应用的维生素B2生产方法主要由化学合成法、化学半合成法和微生物发酵法三种。与化学合成法相比，微生物发酵法具有生产工艺简单、原料廉价以及对环境污 染少、绿色可再生等优点。因此，生物方法生产维生素B2倍受世界维生素B2生产商的青睐，正在逐渐代替以石油为基础的化学合成法。

维生素B2的生物发酵过程是一个复杂的代谢过程，发酵菌株和发酵工艺条件是影响微 生物发酵产量和经济效益的关键因素。枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)目前广泛的用于维生素B2的微生物发酵中，利用枯草芽孢杆菌杆菌生产VB2的发酵是传统的恒温恒pH的生产工艺，其维生素B2的产量还是不够高，无法满足维生素B2工业的高产、节能要求。因此，亟需根据枯草芽孢杆菌的菌种性能分析，提供一种优化的枯草芽包干局发酵生产维生素B2的新方法，极大提高维生素B2的生产能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生产维生素B2的发酵方法，克服前述现有技术中的不足，极大提高枯草芽孢杆菌发酵生产维生素B2工艺的生产能力。

本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：一种生产维生素B2的发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）斜面培养：将枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基，于35-37℃培养箱内培养46-50h；

（2）母瓶培养：从步骤（1）培养完成的斜面培养基上刮取两环菌接种于摇瓶中，摇瓶内液体培养基100ml，培养条件为转速200-220rpm，温度36.5-38℃，培养周期24-25h；

（3）一级种子培养：待步骤（2）中摇瓶中OD值净增10-14时，按接种量0.8-1.2%接入一级种子罐培养，一级种子罐内含种子培养基，培养条件为罐压0.03-0.05Mpa，vvm0.6-0.8，罐温为36-36.5℃，转速150-180rpm，培养周期20-22h；

（4）二级种子培养：待步骤（3）中一级种子OD值净增10-14时，按接种量6-10%接入二级种子罐中培养，二级种子罐内含种子培养基，二级种子罐培养条件为罐压0.03-0.05Mpa，vvm0.6-1.0，罐温为36-36.5℃，转速160-200rpm，培养周期18-20h；