[发明专利]制备人绒毛膜干细胞培养液的方法及其应用在审
| 申请号： | 201811128285.1 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109234228A | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 魏色东 | 申请（专利权）人： | 深圳市乔水生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;A61K8/99;A61K8/9794;A61Q19/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 肖宇扬;付静 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市福田区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种制备人绒毛膜干细胞培养液的方法及其应用，包括以下步骤：使用胰酶消化对数生长期的JEG‑3人绒毛膜细胞；终止消化，利用无血清悬浮培养法富集细胞悬液中的人绒毛膜干细胞，获得JEG‑3悬浮细胞球悬液；利用胰酶和EDTA进行消化，终止消化后，加入干细胞培养基传代培养，培养过程中提供照射剂量率为165.44cGy/min的2～4Gy剂量钴60γ射线照射，并加入基质细胞衍生因子‑1α，获得人绒毛膜干细胞培养物；离心，过滤，除去人绒毛膜干细胞，得到滤液即为人绒毛膜干细胞培养液。本法有效富集人绒毛膜干细胞，并通过改善传代培养条件，得到含有多种高含量旁分泌组分的人绒毛膜干细胞培养液，其可作为活性物质，添加到护肤美容品中，使得护肤美容品具有抗老化等功效。 | ||
| 搜索关键词： | 绒毛膜 干细胞培养液 钴60 γ射线 干细胞 护肤美容品 传代培养 消化 制备 基质细胞衍生因子 干细胞培养基 干细胞培养物 对数生长期 绒毛膜细胞 悬浮培养法 活性物质 细胞悬液 悬浮细胞 胰酶消化 有效富集 照射剂量 抗老化 球悬液 无血清 富集 胰酶 分泌 过滤 应用 照射 | ||
【主权项】：
1.一种制备人绒毛膜干细胞培养液的方法，包括以下步骤：步骤a.使用0.25vol％胰酶消化处于对数生长期的JEG‑3人绒毛膜细胞系；步骤b.移除胰酶消化液终止消化，利用无血清悬浮培养法富集含有所述JEG‑3人绒毛膜细胞系的细胞悬液中的人绒毛膜干细胞，获得JEG‑3悬浮细胞球悬液；步骤c.利用0.05％胰酶和0.02％EDTA对所述JEG‑3悬浮细胞球悬液进行消化，终止消化后，加入干细胞培养基传代培养，传代培养过程中提供2～4Gy剂量钴60γ射线照射，照射剂量率为165.44cGy/min，并加入基质细胞衍生因子‑1α，获得人绒毛膜干细胞培养物；步骤d.将所述人绒毛膜干细胞培养物离心，过滤，除去人绒毛膜干细胞，得到滤液即为所述人绒毛膜干细胞培养液。
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