[发明专利]一种检测奥尼罗非鱼IGF-1等位基因表达的方法及其试剂盒有效
| 申请号： | 201811107882.6 | 申请日： | 2018-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN109207605B | 公开（公告）日： | 2021-07-16 |
| 发明（设计）人： | 钟欢;周毅;罗永巨;肖俊;张孝瑾;韩卓君;于凡;郑惠芳;唐瞻杨;郭忠宝 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区水产科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南宁启创知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 45122 | 代理人： | 谢美萱 |
| 地址： | 530021 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测奥尼罗非鱼IGF‑1等位基因表达的方法及其试剂盒，属于生物化学与分子生物学领域。本发明的检测方法包括(1)RNA逆转录；(2)PCR扩增；(3)焦磷酸测序反应。本发明的试剂盒包括PCR扩增的特异性引物和焦磷酸测序引物。本发明的方法可实时监测反应并且定量、快速检测，具有特异性强等优点，为简便、快速地检测奥尼罗非鱼IGF‑1等位基因表达带来便利，而且检测成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 罗非鱼 igf 等位基因 表达 方法 及其 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种检测奥尼罗非鱼IGF‑1等位基因表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)RNA逆转录：取健康奥尼罗非鱼肝脏，提取肝脏的RNA，将提取的RNA逆转录为模板cDNA；(2)PCR扩增：以步骤(1)得到的cDNA为模板，以PS231‑F，PS231‑BR为特异性引物进行PCR扩增反应，得到待测核酸片段；所述正向引物序列PS231‑F：5’‑CAAGATTTCTCGCTCTGTGC‑3’；所述反向引物序列PS231‑BR：5’‑CGCTGTCCTACGCTCTGTC‑3’；(3)焦磷酸测序反应：将步骤(2)得到的待测核酸片段转入含有测序引物的退火缓冲溶液中，进行焦磷酸测序反应，然后进行结果分析，获得奥尼罗非鱼IGF‑1等位基因的表达比例；所述测序引物PS231‑FS为：5’‑ACCCAAGGTTAGTAGCAG‑3’。
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