[发明专利]基于铜纳米簇荧光探针定量检测溶液中谷丙转氨酶的方法

摘要

本发明公开了一种基于铜纳米簇荧光探针定量检测溶液中谷丙转氨酶的方法,它以谷胱甘肽为保护剂的铜纳米簇作为荧光探针，通过荧光“off‑on”模式特异性检测溶液中谷丙转氨酶含量。通过采用荧光“off‑on”模式实现了对谷丙转氨酶进行免标记、高灵敏、选择性的检测，该方法简便，快捷，可以实现对谷丙转氨酶的特异性检测，检测线性范围宽，检出限低，本发明具有较好的检测灵敏度和选择性，在疾病检测和临床应用等方面具有很好的应用前景。

主权项

1.一种基于铜纳米簇荧光探针定量检测溶液中谷丙转氨酶的方法,它以谷胱甘肽为保护剂的铜纳米簇作为荧光探针，通过荧光“off‑on”模式特异性检测溶液中谷丙转氨酶含量，其特征在于按如下的步骤进行：硫普罗宁母液配置：称取0.1000 g硫普罗宁溶于5 mL高纯水中；将母液稀释之浓度为1 mg/mL的低浓度，低温保存待用；分别配置浓度为1,5，50,100,500,1000 U/L的谷丙转氨酶溶液，低温保存待用；(3) 将制备好的基于谷胱甘肽为稳定剂的铜纳米簇均匀分散到高纯水中，配制成浓度为0.675 mM，体积为4 mL的检测体系，并利用荧光分光光度计测定此时的荧光强度，在激发波长354 nm的激发下，该荧光探针在632 nm处表现出较强发射；(4) 将1.2 mL铜纳米簇均匀分散到2.6 mL高纯水中，混合均匀后，向混合溶液中加入0.1 mL 1 mg/mL的硫普罗宁溶液，加高纯水0.1 mL，待硫普罗宁与铜纳米簇溶液充分作用后测试体系的荧光强度，此时的荧光强度发生明显猝灭，故硫普罗宁可作为该检测体系的猝灭剂；(5) 向离心管中加入2.6 mL高纯水中，1.2 mL铜纳米簇溶液，混合均匀后，向混合溶液中加入0.1 mL 1 mg/mL的硫普罗宁溶液，充分反应后再加入0.1 mL谷丙转氨酶溶液，硫普罗宁与谷丙转氨酶充分作用，使得荧光强度恢复并检测其荧光发射光谱，通过与（4）中荧光强度对比，可以利用荧光发射光谱强度的恢复值证明该铜纳米簇作为荧光探针检测谷丙转氨酶的可行性；(6) 检测溶液中谷丙转氨酶的含量线性的测定向离心管中分别加入0.2~3.4 mL 高纯水，0.4~3.6 mL 铜纳米簇溶液，0.1 mL硫普罗宁溶液，向混合溶液中分别加入0.1 mL不同浓度1~1000 U/L的谷丙转氨酶溶液，充分反应1~15 min，分别用荧光分光光度计检测加入谷丙转氨酶前后的荧光强度；所述的铜纳米簇是指基于谷胱甘肽为稳定剂的铜纳米簇。