[发明专利]一种利用红松催芽种子萌发芽体诱导不定芽的方法

摘要

一种利用红松催芽种子萌发芽体诱导不定芽的方法，它涉及林木种苗繁殖领域。本发明要解决目前红松器官发生困难，不定芽分化率低的问题。它括以下几个步骤：(1)外植体的取材与消毒处理；(2)不定芽的诱导分化培养；(3)不定芽的伸长培养；(4)再生植株的生根诱导培养。以经催芽处理的红松种子为外植体接种在分化培养基上，培养30d；获得不定芽后，将不定芽转移至伸长培养基上，继续培养60d(中间继代一次)，待丛生苗长至2‑3cm长时，将其切割分离并转接入生根培养基驯化。本发明不定芽诱导率达92.2％，每个外植体平均芽数达10‑12个，伸长生长培养60d芽高3.5cm，生根率达52％。

主权项

1.一种利用红松催芽种子萌发芽体诱导不定芽的方法，其特征在于按照如下步骤进行操作：/n（1）外植体的取材与消毒处理：取前一年收获的经混沙低温窑藏催芽处理的成熟红松种子，首先将红松抽出的芽体从种壳中取出，去掉胚乳后，洗衣粉水洗涤，流水下冲洗干净，去除种壳后采用质量百分含量为10%次氯酸钠浸泡15min，无菌水冲洗5次，体积百分含量为70%酒精浸泡1mim，无菌水冲洗5次，再置于质量百分含量为0.1%的升汞溶液中消毒10min后，无菌水冲洗5次，即得到经过预处理的催芽红松种子外植体；/n（2）不定芽的诱导：将步骤（1）消毒处理获得的外植体于超净工作台中切去胚根部位，按照形态学方向竖直放置于DCR培养基中进行不定芽的诱导培养；其中， DCR培养基中含2mg/L KT、0.5mg/L TDZ、500mg/L酸水解酪蛋白、500mg/L L-谷氨酰胺、质量百分含量为3%的蔗糖和质量百分含量为0.7%的琼脂，DCR培养基pH值5.7~5.8；/n诱导培养条件：温度23±2℃、湿度60%~70%、光照时间14h/d、光照强度：2000-3000lux，培养时间为30d；/n（3）不定芽的伸长生长：将步骤（2）诱导培养30d后获得的不定芽转接于DCR培养基中进行不定芽的伸长与增壮培养60d，并在培养至30d，更换一次新鲜的DCR培养基；/n其中，DCR培养基含浓度为0.1mg/L的NAA、浓度为0.2~0.5mg/L的6-BA、浓度为500mg/L酸水解酪蛋白、500mg/L L-谷氨酰胺、1g/L活性炭，3%的蔗糖和0.7%的琼脂，DCR培养基pH值5.7~5.8；诱导培养条件：温度23±2℃、湿度60%~70%、光照时间14h/d、光照强度：2000-3000lux，培养时间为60d，其中30d更换一次新鲜的培养基；/n（4）不定芽的生根诱导：将步骤（3）伸长与增壮培养的不定芽丛分离切割成单芽后置于1/2DCR培养基中进行生根驯化，即完成所述的；其中，1/2DCR培养基含0.5mg/L NAA、500mg/L酸水解酪蛋白、1g/L活性炭、 2%蔗糖和0.7%琼脂，pH值5.7~5.8。/n