[发明专利]一种小球藻-不动杆菌-假单胞菌联合去除养殖废水氮、磷的方法

摘要

本发明公开了一种小球藻‑不动杆菌‑假单胞菌联合去除养殖废水氮、磷的方法。本发明利用小球藻分离培养出伴生的不动杆菌和假单胞菌，并将小球藻、不动杆菌和假单胞菌联合起来用于去除养殖废水中的氮和磷。本发明通过将小球藻、不动杆菌和假单胞菌联合使用，具有协同增效的效果，可以显著去除养殖废水中的氮、磷，具有良好的应用前景和市场价值。

主权项

1.一种小球藻‑不动杆菌‑假单胞菌联合去除养殖废水氮、磷的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)初步培养物的获得：取10‑20L养殖废水，经粗滤、离心去除悬浮物和大型浮游生物，再抽滤得到滤液，再从滤膜上收集沉淀物，转移到M0液体培养基，全天光照、25℃下培养2～3天，摇床转速100rpm，得到小球藻‑不动杆菌初步培养物；(2)小球藻的分离、培养与强化：取所述小球藻‑不动杆菌初步培养物，稀释后5000rpm离心，所得沉淀接种于M0固体培养基，分离、转接，得到小球藻藻株；将所述小球藻藻株接种于M1液体强化培养基，全天光照、25℃下摇床转速150rpm培养2～3天后，转接至新的M1液体强化培养基培养，如此重复培养2周，得到强化后的小球藻；(3)伴生不动杆菌的获得：取所述小球藻‑不动杆菌初步培养物，5000rpm离心后加入M2液体培养基，继续25℃、非光照条件下扩大培养3～4天后，5000rpm离心去掉上清液，更换等体积的新鲜M1液体强化培养基，得到不动杆菌的初步培养物；定期测定培养液中磷的含量，当磷去除率达到60％以上时，取培养液5000rpm离心，所得沉淀物转入M0固体培养基中培养、分离，得到小球藻伴生的不动杆菌；(4)伴生假单胞菌的获得：取步骤(2)所述强化后的小球藻，置于500ml～1L的M0液体培养基，经过全天光照、25℃下培养3～5天，然后取出5～10ml液体，5000rpm离心后加入M3液体培养基，继续25℃、非光照条件下扩大培养3～6天后，5000rpm离心去掉上清液，更换等体积的新鲜M3液体培养基，采用低溶解氧培养的方式，定期测定培养液中氮、磷的含量，当氮去除率达到75％以上、磷去除率达到60％以上时，取培养液5000rpm离心，所得沉淀物转入M3固体培养基中培养、分离，得到小球藻伴生的假单胞菌；(5)将步骤(2)强化后的小球藻、步骤(3)所得不动杆菌和步骤(4)所得假单胞菌混合，放入养殖废水中使其自然生长3～7天，即可完成对养殖废水中氮、磷的去除；其中，每升所述M0液体培养基包括如下组分：NaNO3 1500mg，K2HPO4 0.04mg，MgSO4·7H2O 75mg，CaCl2·2H2O 36mg，柠檬酸6mg，EDTA 1mg，Na2CO3 20mg；每升所述M0固体培养基包括如下组分：NaNO3 1500mg，K2HPO4 0.04mg，MgSO47H2O 75mg，CaCl2 2H2O 36mg，柠檬酸6mg，EDTA 1mg，Na2CO3 20mg，琼脂粉2wt％；每升所述M1液体强化培养基包括如下组分：NaNO3 2000mg，K2HPO4 0.05mg，柠檬酸6mg；每升所述M2液体培养基包括如下组分：CH3COONa 4g，Na2HPO4 30mg，NH4Cl 60mg，CaCl2·2H2O 17.2mg，pH为7.0；每升所述M3液体培养基包括如下组分：CH3COONa 0.3g，Na2HPO4 30mg，NH4Cl 100mg，CaCl2.2H2O 0.5mg，MgSO47H2O 0.2g，pH为7.0～7.5；每升所述M3固体培养基包括如下组分：CH3COONa 0.3g，Na2HPO4 30mg，NH4Cl 60mg，CaCl2.2H2O 0.5mg，蛋白胨16g，明胶冻18.0g，pH为7.0～7.5。