[发明专利]一种固定化木质素过氧化物酶的制备方法及应用

摘要

一种固定化木质素过氧化物酶的制备方法及应用，制备方法包括以下步骤：（1）通过三氯化铁、柠檬酸钠和醋酸钠制备四氧化三铁纳米粒子；（2）制备磁性二氧化硅纳米粒子；（3）制备多巴胺聚合包埋磁性二氧化硅纳米粒子；（4）通过多巴胺聚合原位包埋制备磁性二氧化硅固定化木质素过氧化物酶；向含有机污染物的废水中加入上述方法制备的固定化木质素过氧化物酶及过氧化氢，室温下反应，以去除有机污染物。本发明制备工艺简便，采用的固定化载体是纳米级颗粒，安全无毒害，稳定性好，比表面积大，与酶的结合率高，在催化体系中的分散性较好，对污染物的去除效率更高，无二次污染的风险，该固定化载体可以通过磁性分离回收重复利用固定化酶。

主权项

1.一种固定化木质素过氧化物酶的制备方法，其特征是，包括以下步骤：(1)制备四氧化三铁纳米粒子：按2‑5g：0.5‑2g：5‑10g：100mL的比例，将三氯化铁、柠檬酸钠和醋酸钠在持续搅拌下依次溶解在乙二醇中，然后转移至高压反应釜中，120‑200℃下反应8‑16h；冷却后，将固体沉淀用水和乙醇洗涤，最后真空干燥，即得到四氧化三铁纳米粒子；(2)制备磁性二氧化硅纳米粒子：按600mg：2‑5mL的比例称取步骤(1)制备的四氧化三铁纳米粒子和正硅酸乙酯，将四氧化三铁纳米粒子均匀分散在水、乙醇和氨水的混合体系中，然后再逐滴滴加正硅酸乙酯，在15‑35℃下振荡6‑12h，用磁铁分离产物，所得沉淀用蒸馏水洗涤除去未反应的原料，最后真空干燥，即得到磁性二氧化硅纳米粒子；(3)制备多巴胺聚合包埋磁性二氧化硅纳米粒子按600mg：200‑500mL的比例将步骤(2)中制备的磁性二氧化硅纳米粒子均匀分散在三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，再以1.2‑2.0mg/mL的浓度添加盐酸多巴胺，在15‑35℃下振荡12‑24h；用磁铁分离产物，所得沉淀用蒸馏水洗涤除去未反应的原料，最后真空干燥，即获得多巴胺聚合包埋磁性二氧化硅纳米粒子，作为固定化木质素过氧化物酶载体；(4)制备固定化木质素过氧化物酶：按1g：5‑50mL的比例将步骤(3)中获得的固定化木质素过氧化物酶载体均匀分散在含有木质素过氧化物酶的酒石酸‑酒石酸钠缓冲液中，木质素过氧化物酶蛋白浓度为0.39mg/mL，在15‑35℃下振荡6‑24h；用磁铁分离产物，所得沉淀用酒石酸‑酒石酸钠缓冲液洗涤，直至上清液中无游离酶，最后冷冻干燥，即获得固定化木质素过氧化物酶。