[发明专利]一种具有玻尿酸的自体胶原蛋白凝胶的制备方法

摘要

本发明涉及一种具有玻尿酸的自体胶原蛋白凝胶的制备方法，属于医学美容技术领域，包括以下步骤：步骤一，获取自体成纤维组织；步骤二，传代培养；步骤三，胶原蛋白积累；步骤四，加入玻尿酸；步骤五，凝胶的制备。该技术方案以自体成纤维细胞产生的胶原蛋白为原料，将玻尿酸与交联剂混合制备凝胶产品，该自体胶原蛋白凝胶无毒副作用，具有较好的生物相容性和组织相容性，可以作为医学美容中的机体组织填充物，其中的血管内皮细胞生长因子能够促进填充后皮下血管的愈合生长，促进血液循环，滋润肌肤，消除皱纹和预防色斑，具有很好的美容功效。

主权项

1.一种具有玻尿酸的自体胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，获取自体成纤维组织，在常温下用生理盐水清洗，将自体成纤维组织剪成小块，向其中加入磷酸缓冲盐溶液混合，室温下离心去除下层液体，用磷酸缓冲盐溶液冲洗后再次离心，去除上清液，加入胶原酶，放置于37℃恒温震荡箱中30min～60min，再次离心去除上清液，然后加入含有胎牛血清的DMEM培养液，用细胞筛过滤后离心去除上清液，再次加入含有胎牛血清的DMEM培养液中，在37℃温度条件下，5％CO2恒温培养；步骤二，传代培养，将步骤一的成纤维细胞每隔2天更换胎牛血清的DMEM培养液，待细胞生长至80％融合后用胰蛋白酶消化后传代，在成纤维细胞生长三代以后，从胎牛血清的DMEM培养液重取出；步骤三，胶原蛋白积累，将成纤维细胞放入无血清培养基，在37℃无血清培养基中培养，使成纤维细胞分泌出胶原蛋白，将成纤维细胞和无血清培养基取出，留存胶原蛋白备用；步骤四，加入玻尿酸，向步骤三中的胶原蛋白中加入玻尿酸，在25℃～30℃的温度条件下搅拌1h～3h后静置；步骤五，凝胶的制备，向步骤四中静置后的混合溶液中加入交联剂，放入45℃～55℃的恒温水浴锅中3h～6h，然后置于无热源蒸馏水中透析3天～5天，得到自体胶原蛋白凝胶。