[发明专利]一种高通量筛选L-氨基酸脱氨酶突变重组菌株的方法在审
| 申请号： | 201810905470.0 | 申请日： | 2018-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN109097383A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 吴黎诚;郭小雷;章权 | 申请（专利权）人： | 浙江正硕生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/53;C12Q1/32;C12Q1/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 裴金华 |
| 地址： | 313000 浙江省湖州市吴兴区康*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及一种高通量筛选L‑氨基酸脱氨酶突变重组菌株的方法，包括如下步骤：1.重组菌构建：全基因合成来源于奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)L‑氨基酸脱氨酶（L‑amino acid deaminase，LAAD）基因（genbank登录号EU669819.1），构建质粒LAAD，转化构建重组菌PMLAAD；2.易错PCR；3.突变文库的建立；4.发酵；5.酶催化反应及显色；6.酶标仪检测；7.筛选突变子发酵和筛选；8.突变株发酵和筛选。通过高通量筛选系统结合易错PCR，大大节约了时间和成本，并提高了筛选效率，提高了获得正突变菌株的几率。 | ||
| 搜索关键词： | 脱氨酶 筛选 突变 发酵 高通量筛选 重组菌株 易错PCR 重组菌 氨基酸 构建 高通量筛选系统 基因工程技术 奇异变形杆菌 酶催化反应 全基因合成 正突变菌株 构建质粒 突变文库 酶标仪 突变株 显色 基因 检测 节约 转化 | ||
【主权项】：
1.一种高通量筛选L‑氨基酸脱氨酶突变重组菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：1. 重组菌构建：全基因合成来源于奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)L‑氨基酸脱氨酶（L‑amino acid deaminase，LAAD）基因（genbank登录号EU669819.1），构建质粒LAAD，转化构建重组菌PMLAAD；2. 易错PCR；3. 突变文库的建立；4. 发酵；5. 酶催化反应及显色；6. 酶标仪检测；7. 筛选突变子发酵和筛选；8. 突变株发酵和筛选。
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