[发明专利]一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法

摘要

本发明涉及一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法，属于医学美容技术领域，包括以下步骤：步骤一，获取脂肪干细胞；步骤二，传代培养；步骤三，低温冷冻；步骤四，脂肪干细胞液的制备。该脂肪干细胞液的制备方法操作简便，生产技术要求不高，适用于大规模生产细胞液产品，能够在生物技术生产车间大规模长时间开展生产过程，制造成本较低，且产品功效很好，并且通过低温冷冻步骤可以延长脂肪干细胞液的保存时间，在需要使用时解除冷冻状态即可，市场前景广阔。

主权项

1.一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，获取脂肪干细胞，获取脂肪组织，用D‑Hanks缓冲液清洗，去除残留的血液和组织碎片，将脂肪组织剪成小脂肪块，把脂肪组织加入消化液，放入37℃恒温震荡箱中消化20min～60min，然后静置待其分层后，吸取上层脂肪细胞液，移入含有胎牛血清的DMEM培养基中，密封离心分离，去除上清液，再次加入适量含有胎牛血清的DMEM培养基，吹打细胞制成脂肪干细胞悬液，接种到培养瓶中，在37℃温度条件下，5％CO2恒温培养，定期更换培养基直到脂肪干细胞铺满培养瓶底部；步骤二，传代培养，将步骤一得到的脂肪干细胞从培养基中取出，加入D‑Hanks缓冲液清洗干净，然后加入酶液消化处理，在脂肪干细胞长到80％～90％融合后传代培养；步骤三，低温冷冻，将步骤二取出的脂肪干细胞用D‑Hanks缓冲液清洗，加入酶液消化1min～3min，按照脂肪干细胞、DMEM培养液、低温保护剂三者的体积百分比2～4:2～4:1进行混合，先缓慢降至0℃后放入低温冷冻装置中冷冻储存制作冷冻干细胞液；步骤四，脂肪干细胞液的制备，将步骤三的混合液从低温冷冻装置中取出，放入37℃恒温水浴中解冻，解冻过程中缓慢加入细胞生长因子和D‑Hanks缓冲液，制成脂肪干细胞液。