[发明专利]一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法

说明书

本发明涉及一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法，属于医学美容技术领域，包括以下步骤：步骤一，获取脂肪干细胞；步骤二，传代培养；步骤三，低温冷冻；步骤四，脂肪干细胞液的制备。该脂肪干细胞液的制备方法操作简便，生产技术要求不高，适用于大规模生产细胞液产品，能够在生物技术生产车间大规模长时间开展生产过程，制造成本较低，且产品功效很好，并且通过低温冷冻步骤可以延长脂肪干细胞液的保存时间，在需要使用时解除冷冻状态即可，市场前景广阔。

技术领域

本发明涉及一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法，属于医学美容技术领域。

背景技术

在人类预期寿命不断延长，人口日益老龄化的现代社会，衰老与长寿问题倍受各方面的关注，减缓皮肤的衰老已经渐渐成为人们追求的目标。人体的衰老，皱纹的出现，究其根源实质上都是细胞的衰老和减少。而细胞的衰老和减少则是由干细胞老化引起的。

脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)、ADSC多能细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。

同时研究表明干细胞生长因子可以快速激活休眠的干细胞并促使其生长，同时可以调节机体内微环境，为干细胞提供有利的生长条件。生长因子多为广义的肽激素，有表皮生长因子、成纤细胞生长因子、血小板来源增殖因子等。有研究表明该类生长因子在美容方面功能强大，能对受损皮肤、敏感皮肤、创伤皮肤以及改建性皮肤具有良好的修复、护理，缩短创伤愈合时间以及减少疤痕形成，再生血管，促进胶原蛋白合成，延缓衰老等。

现有的美容保养品，大都通过化工方法制得，其产品中的有害物质残留较多，长期使用会对皮肤产生不利影响。而且现有产品大都不具有生物活性物质，不能够有效促进表皮细胞的新陈代谢，改善皮肤的光泽。而且，化工护肤品中含有的部分物质会对人体产生过敏反应，不适合全体人群使用。因此研发一种对皮肤友好，并且能减缓皮肤衰老的皮肤保养产品，具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明实施例提供了一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法，通过脂肪干细胞培养得到细胞液产品，其中的低温冷冻步骤能能够延长保存时间，利用脂肪干细胞分泌各种生长因子，促进皮肤创面再生愈合。具体技术方案如下：

一种用于美容保养的脂肪干细胞液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一，获取脂肪干细胞，获取脂肪组织，用D-Hanks缓冲液清洗，去除残留的血液和组织碎片，将脂肪组织剪成小脂肪块，把脂肪组织加入消化液，放入37℃恒温震荡箱中消化20min～60min，然后静置待其分层后，吸取上层脂肪细胞液，移入含有胎牛血清的DMEM培养基中，密封离心分离，去除上清液，再次加入适量含有胎牛血清的DMEM培养基，吹打细胞制成脂肪干细胞悬液，接种到培养瓶中，在37℃温度条件下， 5％CO₂恒温培养，定期更换培养基直到脂肪干细胞铺满培养瓶底部；

步骤二，传代培养，将步骤一得到的脂肪干细胞从培养基中取出，加入D-Hanks缓冲液清洗干净，然后加入酶液消化处理，在脂肪干细胞长到80％～90％融合后传代培养；

步骤三，低温冷冻，将步骤二取出的脂肪干细胞用D-Hanks缓冲液清洗，加入酶液消化1min～3min，按照脂肪干细胞、DMEM培养液、低温保护剂三者的体积百分比2～4:2～4:1进行混合，先缓慢降至0℃后放入低温冷冻装置中冷冻储存制作冷冻干细胞液；

步骤四，脂肪干细胞液的制备，将步骤三的混合液从低温冷冻装置中取出，放入37℃恒温水浴中解冻，解冻过程中缓慢加入细胞生长因子和D-Hanks缓冲液，制成脂肪干细胞液。