[发明专利]土壤脲酶的测定方法

摘要

土壤脲酶的测定方法，该方法涉及一种脲酶的测定方法。本发明解决目前比色法测定土壤脲酶活性的测定效果不稳定、准确率较低的问题。测定方法：一、获得样品测量液；二、无土对照样、无基质对照样制备；三、获得初步NH₃‑N浓度、无土对照样NH₃‑N浓度和无基质对照样NH₃‑N浓度；四、计算：以1g土壤中NH₃‑N的质量表示脲酶活性：Ure＝a·V·n/m。本发明测定土壤脲酶活性平行性好，变异系数小，方法可行性高、精确度高。

主权项

1.土壤脲酶的测定方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、取4.95g～5.05g风干土样品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用缓冲工作液摇匀，再在37℃±1℃恒温箱中培养23h～25h，获得样品测量液；二、无土对照样、无基质对照样制备：取4.95g～5.05g水加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用缓冲工作液摇匀，再在37℃±1℃恒温箱中培养23h～25h，即得到无土对照样；取4.95g～5.05g风干土样品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL水和20mL±2μL修正通用缓冲工作液摇匀，再在37℃±1℃恒温箱中培养23h～25h，即得到无基质对照样；三、过滤步骤一样品测量液，取1mL±2μL滤液加蒸馏水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚钠溶液和3mL±2μL次氯酸钠溶液，边加边摇匀，20min～25min后显色，定容，1h内分光光度计波长578nm比色，测定吸光值再与氮溶液浓度标准曲线比较，获得初步NH3‑N浓度；过滤步骤二无土对照样和无基质对照样测量液，分别取1mL±2μL滤液加蒸馏水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚钠溶液和3mL±2μL次氯酸钠溶液，边加边摇匀，20min～25min后显色，定容，1h内分光光度计波长578nm比色，测定吸光值再与氮溶液浓度标准曲线比较，获得无土对照样NH3‑N浓度和无基质对照样NH3‑N浓度；四、计算以1g土壤中NH3‑N的质量表示脲酶活性：Ure＝a·V·n/m其中：a为样品测量液NH3‑N浓度，样品测量液NH3‑N浓度＝初步NH3‑N浓度‑无土对照样NH3‑N浓度‑无基质对照样NH3‑N浓度；V为显色液体积；n为样品测量液的分取倍数；m为烘干土重；其中，尿素溶液为24g～26g尿素溶于水中，并用蒸馏水定容至250mL制成；修正通用缓冲工作液是199～201mL修正通用缓冲储备液用0.1M HCl调节至pH6.0，然后用蒸馏水定容到1L制成；上述修正通用缓冲储备液是将12.0g～12.2g Tris、11.5g～11.7g顺丁烯二酸、13.9g～14.1g柠檬酸一水化合物和6.2g～6.4g硼酸溶于490mL～510mL 1M NaOH中，再用蒸馏水定容到1000mL制成。