[发明专利]土壤脲酶的测定方法

权利要求书

1.土壤脲酶的测定方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、取4.95g～5.05g风干土样品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用缓冲工作液摇匀，再在37℃±1℃恒温箱中培养23h～25h，获得样品测量液；

二、无土对照样、无基质对照样制备：

取4.95g～5.05g水加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用缓冲工作液摇匀，再在37℃±1℃恒温箱中培养23h～25h，即得到无土对照样；

取4.95g～5.05g风干土样品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL水和20mL±2μL修正通用缓冲工作液摇匀，再在37℃±1℃恒温箱中培养23h～25h，即得到无基质对照样；

三、过滤步骤一样品测量液，取1mL±2μL滤液加蒸馏水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚钠溶液和3mL±2μL次氯酸钠溶液，边加边摇匀，20min～25min后显色，定容，1h内分光光度计波长578nm比色，测定吸光值再与氮溶液浓度标准曲线比较，获得初步NH₃-N浓度；过滤步骤二无土对照样和无基质对照样测量液，分别取1mL±2μL滤液加蒸馏水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚钠溶液和3mL±2μL次氯酸钠溶液，边加边摇匀，20min～25min后显色，定容，1h内分光光度计波长578nm比色，测定吸光值再与氮溶液浓度标准曲线比较，获得无土对照样NH₃-N浓度和无基质对照样NH₃-N浓度；四、计算

以1g土壤中NH₃-N的质量表示脲酶活性：

Ure＝a·V·n/m

其中：a为样品测量液NH₃-N浓度，样品测量液NH₃-N浓度＝初步NH₃-N浓度-无土对照样NH₃-N浓度-无基质对照样NH₃-N浓度；V为显色液体积；n为样品测量液的分取倍数；m为烘干土重；

其中，尿素溶液为24g～26g尿素溶于水中，并用蒸馏水定容至250mL制成；

修正通用缓冲工作液是199～201mL修正通用缓冲储备液用0.1M HCl调节至pH6.0，然后用蒸馏水定容到1L制成；

上述修正通用缓冲储备液是将12.0g～12.2g Tris、11.5g～11.7g顺丁烯二酸、13.9g～14.1g柠檬酸一水化合物和6.2g～6.4g硼酸溶于490mL～510mL 1M NaOH中，再用蒸馏水定容到1000mL制成。

2.根据权利要求1所述的土壤脲酶的测定方法，其特征在于步骤三中氮溶液浓度标准曲线按以下步骤绘制分别取0mL、1mL、3mL、5mL、7mL、9mL、11mL和13mL氮工作液加蒸馏水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚钠溶液和3mL±2μL次氯酸钠溶液，边加边摇匀，20min～25min后显色，定容，1h内分光光度计波长578nm比色，绘制氮溶液浓度标准曲线。

3.根据权利要求1或2所述的土壤脲酶的测定方法，其特征在于步骤三中定容至50mL。

4.根据权利要求1所述的土壤脲酶的测定方法，其特征在于步骤三中苯酚钠溶液按以下步骤配制：称62g～63g苯酚溶于乙醇中，再加1.8mL～2.2mL甲醇和18.3mL～18.7mL丙酮，然后用乙醇稀释至100mL，即得到A液；称26g～28g氢氧化钠用水定容到100mL，即得到B液；取A液、B液各20mL±2μL混合，再用蒸馏水定容至100mL，即得到苯酚钠溶液。

A液、B液使用前保存在冰箱中，使用时进行混合。