[发明专利]一种重组人PM/Scl100融合蛋白及其制备方法在审
| 申请号： | 201810809491.2 | 申请日： | 2018-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN108998461A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 李庆春;杨阳;钱林;周延庆 | 申请（专利权）人： | 江苏浩欧博生物医药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/866;C07K19/00 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 汪青;周敏 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种重组人PM/Scl100融合蛋白的制备方法，合成人PM/Scl100基因并在两端添加酶切位点后，亚克隆至克隆载体构建重组质粒；将重组质粒经限制性内切酶消化后，在T4连接酶的作用下，与经过相同限制性内切酶消化后的真核表达载体连接，然后转化大肠杆菌JM109，获得重组载体；将重组载体转化大肠杆菌DH10Bac，获得重组杆粒；将重组杆粒转染进入SF9细胞制得杆状病毒；将杆状病毒转染进入SF9细胞获得重组蛋白；对重组蛋白进行纯化获得所述的重组人PM/Scl100融合蛋白。本发明能够高效表达、生产重组人PM/Scl100融合蛋白，获得的重组人PM/Scl100融合蛋白的纯度高，收率高。 | ||
| 搜索关键词： | 融合蛋白 限制性内切酶 大肠杆菌 杆状病毒 重组蛋白 重组杆粒 重组载体 转染 制备 构建重组质粒 真核表达载体 消化 高效表达 克隆载体 酶切位点 生产重组 重组质粒 亚克隆 收率 转化 合成 基因 | ||
【主权项】：
1.一种重组人PM/Scl100融合蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）合成人PM/Scl100基因并在两端添加酶切位点后，亚克隆至克隆载体构建重组质粒；（2）将步骤（1）获得的重组质粒经限制性内切酶消化后，在T4连接酶的作用下，与经过相同限制性内切酶消化后的真核表达载体连接，然后转化大肠杆菌JM109感受态细胞，获得重组载体；（3）将步骤（2）获得的重组载体转化大肠杆菌DH10Bac，获得重组杆粒；（4）将步骤（3）获得的重组杆粒转染进入SF9细胞制得杆状病毒；（5）将步骤（4）获得的杆状病毒转染进入SF9细胞获得重组蛋白；（6）对步骤（5）获得的重组蛋白进行纯化获得所述的重组人PM/Scl100融合蛋白。
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