[发明专利]一种对硝基苯酚的快速降解方法

摘要

本发明公开了一种对硝基苯酚（p‑nitrophenol，PNP）的快速降解方法，根据细菌降解芳香类化合物代谢通路具有交叉性的特点，构建含有代谢通路中限速酶单加氧酶和双加氧酶两种酶的降解性质粒；将降解性质粒电转移进入强成膜细菌中形成工程性强成膜细菌；将工程性强成膜细菌投入到PNP污染的水体中，由于工程性强成膜细菌能够促使水体中稳定生物被膜的形成，而菌体内携带的降解性质粒能通过基因水平转移进入在生物被膜群落中各种不同种属的菌体内，提高了两种限速酶表达量，从而促进了PNP的代谢。本发明的对硝基苯酚降解方法不仅能够明显提高生物被膜的降解能力，大幅提高降解效率，而且生物性降解法的环境相容性高，可以避免二次污染，有效地保护了环境。

主权项

1.一种对硝基苯酚的快速降解方法，其特征在于，具体步骤如下:步骤1）利用基因工程技术构建降解性质粒；对对硝基苯酚降解菌进行基因测序，确定其基因组内含有的降解功能的基因岛，从中克隆出单加氧酶基因和双加氧酶基因；通过基因工程技术，将单加氧酶基因和双加氧酶基因克隆进组成型表达质粒，构建成一个含有单加氧酶和双加氧酶的双酶组成型表达质粒；将该双酶组成型表达质粒导入大肠杆菌体内，检测其降解活性，最终形成一个降解性质粒；步骤2）降解性质粒导入强成膜细菌菌体内，制备工程性强成膜细菌；将构建好的降解性质粒经电击转化的方式转移至强成膜菌体内，利用抗生素平板选择性培养筛选，检测绿色荧光蛋白基因，鉴定得到阳性克隆的工程性强成膜细菌；步骤3）工程性强成膜细菌投入废水中降解对硝基苯酚；先将填料投加到被对硝基苯酚污染的水体中，然后再将制得的工程性强成膜细菌投入到水体中，由于工程性强成膜细菌本身具有强成膜性，因此工程性强成膜细菌会在填料上成膜，促使其在水体中能够结合土著菌形成稳定生物被膜群落，而工程性强成膜细菌菌体内携带的降解性质粒能通过基因水平转移进入在生物被膜群落中各种不同种属的土著菌体内，提高了单加氧酶和双加氧酶两种限速酶表达量从而促进了对硝基苯酚的代谢，提高了降解效率。