[发明专利]一种抗体复合物的制备方法在审
| 申请号： | 201810461883.4 | 申请日： | 2018-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN108610415A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 贾凌云;臧柏林;任军 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K16/46 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 李银姬;李馨 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开一种抗体复合物的制备方法。本发明通过在冰冻条件下实现C端‑C端连接的二价或双特异性抗体复合物的制备，条件温和，反应速度快，收率较高。相比常规方法所生产的C端‑N端连接的二价或双特异性抗体复合物本发明能够得到更高的亲和力，相比现有制备C端‑C端连接的二价或双特异性抗体的二硫桥接法或点击化学法，本发明具有更好的特异性和稳定性，同时步骤较少，表现在只在C端生成的醛基进行连接，生成的腙键或肟键在生理条件下稳定并且用还原剂还原后不可逆。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 双特异性抗体 二价 抗体复合物 复合物 点击化学法 反应速度快 冰冻条件 生理条件 不可逆 二硫桥 还原剂 亲和力 醛基 收率 肟键 腙键 还原 表现 生产 | ||
【主权项】：
1.一种C端‑C端连接的二价抗体或双特异性抗体复合物的制备方法，包括如下步骤：(1)通过基因重组在抗体的C末端融合FGE识别氨基酸序列，通过体外加入FGE进行催化，得C末端定点醛基修饰的抗体；(2)将C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头，在冰冻条件下反应，得二价抗体复合物，其中所述C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头的摩尔比为1:0.4～1.2；(3)将C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头，在冰冻条件下反应，得单一同双官能接头连接的抗体，其中所述C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头的摩尔比为1:5～15；(4)将步骤(3)得到的抗体和C末端定点醛基修饰的抗体，在冰冻条件下反应，得双特异性抗体复合物，其中步骤(3)得到的抗体和C末端定点醛基修饰的抗体的可变区不同。
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- 提供了一种制备抗体治疗剂的方法，其包含：(a)从得自患者的至少一个实体瘤样品提供解离的细胞样品；(b)将解离的细胞样品加载到微流体装置中，该微流体装置具有流动区域和至少一个与流动区域流体连接的分离区域；(c)将至少一个B细胞从解离的细胞样品移动进入微流体装置中的至少一个分离区域，从而获得至少一个分离的B细胞；以及(d)使用微流体装置来识别产生能够与癌细胞结合的抗体的至少一个B细胞。癌细胞可以是患者自身的癌细胞。还提供了治疗患者的方法、标记或检测癌症的方法、包含抗体或其片段的工程化的T或NK细胞以及工程化的抗体构建体。
- 细菌双杂交纳米抗体筛选系统及其构建方法和应用-201910145037.6
- 汪洋;杨慕晗;程鑫茹;李晓波;王玉琪;连慧慧 - 南京理工大学
- 2019-02-27 - 2019-06-25 - C07K16/00
- 本发明公开了一种细菌双杂交纳米抗体筛选系统及其构建方法和应用。所述的细菌双杂交纳米抗体筛选系统由含有LexAWT基因元件的pMHA2质粒和含有LexA408基因元件的pMHN2质粒组成。嵌合型双抑制子LexAWT/LexA408可以联同抗原抗体相互作用抑制下游PsulA‑cI857基因的表达，间接激活PR‑KanR基因的表达，构建严谨高效的纳米抗体阳性筛选系统。候选纳米抗体为合成文库，采用简并引物的方式在CDR3区域引入48个随机碱基并去除了终止密码子以及半胱氨酸密码子。本发明的细菌双杂交纳米抗体筛选系统能够快速、高效、准确地筛选给定抗原的纳米抗体。
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