[发明专利]一种幽门螺杆菌高通量菌落PCR快速分析方法

摘要

本发明提供了一种幽门螺杆菌高通量菌落PCR快速分析方法。本发明涉及基因的分子生物学领域，具体涉及幽门螺杆菌基因的PCR扩增领域。经过优化的幽门螺杆菌基因PCR扩增方法，可快速、高通量实现幽门螺杆菌菌体或菌落的直接PCR扩增，不需要大量培养细菌提取其基因组，该方法提高了幽门螺杆菌基因扩增及分析的效率，尤其适用于幽门螺杆菌大量样本基因型的检测与分析。

主权项

1.一种幽门螺杆菌高通量菌落PCR快速分析方法，包括以下步骤：（1）在0.2 ml PCR管或96孔PCR板中加入10 μL去离子水或生理盐水，用牙签挑取幽门螺杆菌菌体或菌落溶解混匀；（2）将混匀好的含有幽门螺杆菌的PCR管或96孔PCR板直接放入沸水域中加热，幽门螺杆菌菌体或菌落煮沸裂解时的细胞浓度小于1×109 CFU/mL，煮沸裂解的时间不小于10s，煮沸裂解后迅速放置于冰上冷却备用；（3）于上述裂解的菌体混悬液中，直接加入浓度为10 μΜ的正向引物和反向引物各1.25 μL，加入2×预混Taq DNA聚合酶12.5 μL，反应总体系25 μL，充分混匀后置于PCR仪中进行聚合酶链式反应，PCR结束后取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。