[发明专利]一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法

摘要

一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：步骤（a），鱿鱼胴体肉判断横纵截面后，取样混合固定液室温4‑6日固定；步骤（b），不接触样品的条件下去除固定液，更换0.9‑1.1M的NaOH溶液；步骤（c），NaOH溶液更换3.4%NaCl溶液进行清洗操作3‑5次/15min后，静止放置一夜；步骤（d），用固定液1固定1‑3h，再用固定液2固定1‑3h后，避开样品胶头滴管吸出固定液2，纯水清洗3‑4次/14‑16min；步骤（e），60‑90%的乙醇按浓度梯度由低到高顺序逐次脱水14‑16min，最后用98‑100%甲醇反复脱水3‑4次，每次脱水14‑16min；步骤（f），脱水样品放入98‑100%乙醇溶液中，利用液态氮快速冻结，冻结的试样用刀片迅速切断，放入叔丁醇中进行置换3‑4次；步骤（g），经冻结干燥器干燥22‑26h后，喷金处理后，利用扫描电镜观察。

主权项

1.一种鱿鱼肌肉细胞结缔组织扫描电镜样品的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括如下步骤：步骤（a）、采肉、前固定：鱿鱼胴体肉判断横纵截面后，取样混合固定液室温4‑6日固定，所述的取样混合固定液的组成是：1.8‑2.2％戊二醛、1.8‑2.2％甲醛、0.35‑0.39 M磷酸缓冲液 pH 7.2‑7.6；步骤（b）、细胞要素的去除：不接触样品的条件下去除固定液，更换0.9‑1.1M的NaOH溶液，震动8‑14日，其间每天更换NaOH溶液；步骤（c）、清洗：NaOH溶液更换3.4% NaCl溶液进行清洗操作3‑5次/15min后，静止放置一夜；步骤（d）、后固定：用固定液1固定1‑3h，再用固定液2固定1‑3h后，避开样品胶头滴管吸出固定液2，纯水清洗3‑4次/14‑16min；所述固定液1的组成为0.8‑1.2%单宁酸和3.4% NaCl；所述的固定液2的组成为：0.8‑1.1%四氧化锇溶液和3.2‑3.6% NaCl；步骤（e）、脱水：60‑90%的乙醇按浓度梯度由低到高顺序逐次脱水14‑16min，最后用98‑100%甲醇反复脱水3‑4次，每次脱水14‑16min；步骤（f）、置换：脱水样品放入98‑100%乙醇溶液中，利用液态氮快速冻结，冻结的试样用刀片迅速切断，放入叔丁醇中进行置换3‑4次，每次14‑16min；步骤（g）、冷冻干燥、金属蒸着、观察：经冻结干燥器干燥22‑26h后，喷金处理后，利用扫描电镜观察。