[发明专利]一种拮抗重金属砷生物毒性的方法

摘要

本发明公开了一种拮抗重金属砷生物毒性的方法，基于纳米银(AgNP)的预防和降低重金属砷(As)的哺乳动物细胞毒性和基因毒性的方法。该方法的具体步骤包括：AL细胞(人鼠杂交瘤细胞)的培养、纳米银的预处理、纳米银/砷的共处理、细胞毒性检测、蛋白质免疫印迹‑基因毒性检测、基于CD59基因突变技术的基因毒性检测。本发明操作简单快捷，纳米银拮抗砷毒性效果优异。与砷单独处理组相比，纳米银预处理时间仅需12小时，细胞毒性和基因毒性的降低均超过40％，且纳米银在所使用的浓度下具有良好的生物安全性，在生物体砷中毒的预防和解毒方面有潜在的应用价值，解决了目前生物体砷中毒的治疗及预防方面的弱势。

主权项

1.一种拮抗重金属砷生物毒性的方法，其特征在于：具体步骤如下：步骤(1)：细胞的培养：将细胞置于含有5‑10％的胎牛血清、1.5×10‑4‑2.5×10‑4mol/L的甘氨酸和20‑30μg/mL的庆大霉素的Ham’s F12培养基中，在36‑37℃，4.5‑5.5％CO2，饱和湿度的细胞培养箱中培养20‑28小时；步骤(2)：纳米银的预处理：吸掉上述Ham’s F12培养基，并用Ham’s F12培养基稀释纳米银，将稀释后的纳米银加入到细胞培养皿中，于细胞培养箱中培养10‑15小时；步骤(3)：纳米银/砷的共处理：用步骤(2)中Ham’s F12培养基稀释砷水溶液然后加入到上述已用纳米银培养的细胞中，并使砷的终浓度为0‑4μg/mL，两者继续培养20‑28小时；步骤(4)：细胞毒性检测：弃去含有纳米银/砷的培养基，然后加入稀释10‑20倍的CCK‑8荧光染料100‑200μL，置于36‑37℃、4.5‑5.5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱中避光孵育1‑4小时，采用酶标仪测定其在450‑490nm处的吸光度；步骤(5)：蛋白质免疫印迹‑基因毒性检测：包括：细胞内总蛋白的提取与浓度测定、十二烷基磺酸钠‑聚丙烯酰胺电泳与转膜、十二烷基磺酸钠‑聚丙烯酰胺电泳与转膜免疫反应与显影；步骤(6)：基于CD59基因突变技术的基因毒性检测：包括：细胞培养、收集细胞、固定、染色、流水清洗、计数统计。