[发明专利]大肠杆菌周质空间表达的蛋白的提取方法在审
| 申请号： | 201810355270.2 | 申请日： | 2018-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN110386978A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 冯军;吴勇;张庆彬;黄宗庆;化浩举;李乐乐 | 申请（专利权）人： | 上海多米瑞生物技术有限公司;上海医药工业研究院 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K1/30 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 胡丹;徐迅 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生物医药领域，涉及大肠杆菌周质空间表达Fab蛋白的提取方法。所述的提取方法包括：将周质空间表达Fab蛋白的重组大肠杆菌菌体混悬于含有二价阳离盐的酸性缓冲液中，进行低压匀浆处理，之后除掉细胞碎片等杂质即得到含有目的蛋白的周质提取液；由此获得的周质提取液调pH值后进行高温加热处理，去除絮状沉淀后得到大肠杆菌周质空间Fab蛋白粗纯化液。本发明提取方法在尽量保证Fab提取收量的基础上有效地去除了Fab相关杂质，将目的蛋白中Fab纯度提高至90％以上，从而降低后续蛋白质层析纯化的难度以及成本。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌周质 蛋白 空间表达 目的蛋白 提取液 周质 高温加热处理 生物医药领域 重组大肠杆菌 酸性缓冲液 蛋白质层 菌体混悬 细胞碎片 絮状沉淀 匀浆处理 周质空间 纯化液 有效地 除掉 二价 去除 保证 | ||
【主权项】：
1.一种大肠杆菌周质空间蛋白提取液的制备方法，其特征在于，包括步骤：(i)混匀步骤，将周质空间分泌表达目的蛋白的重组大肠杆菌菌体混匀于酸性溶液中，获得菌体混悬液；(ii)匀浆步骤，对步骤(i)中的菌体混悬液进行N次匀浆处理，获得匀浆液，其中N为≥1的正整数，优选N为1‑15，更优选N为2‑10，最优选N为3‑5；(iii)杂质去除步骤，对步骤(ii)中获得的匀浆液进行杂质去除处理，获得大肠杆菌周质空间蛋白提取液。
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