[发明专利]一种基于同位素稀释-可编辑多反应监测模式的19种苯并咪唑类药物残留量的测定方法

摘要

本发明建立了测定乳制品中苯并咪唑类药物及其代谢物残留量的高效液相色谱‑串联四级杆质谱法。试样采用水‑饱和氯化钠溶液‑乙腈溶液提取，乙腈饱和正己烷脱脂净化直接稀释后，经Atlantis T3(4.6mm×100mm，3μm)色谱柱分离，以乙腈‑0.1％甲酸溶液为流动相，采用电喷雾离子源串联质谱，在正离子扫描方式下以可编辑多反应监测(Scheduled MRM)模式检测，同位素内标法定量。结果表明：19种苯并咪唑类药物在0.02～1.0μg/L质量浓度范围内线性关系良好，定量限为0.025μg/kg～4.0μg/kg。在三个加标水平下的平均回收率为81.4％～108.2％％，相对标准偏差为0.4％～9.3％。该方法操作简便，灵敏度高，抗干扰能力强，回收率和重复性良好。

主权项

1.一种基于同位素稀释‑可编辑多反应监测模式的19种苯并咪唑类药物残留量的测定方法，其特征在于具体步骤如下：标准溶液及标准曲线配制，样品基质采用水‑饱和氯化钠溶液‑乙腈为提取溶剂进行提取，再以乙腈饱和正己烷溶液来进行液液萃取净化，经液相色谱分离，再采用电喷雾离子源串联质谱，在正离子扫描方式下以可编辑多反应监测模式检测，同位素内标法定量；所述的样品基质包括：牛奶、羊奶、牛奶粉或羊奶粉；测定样品基质和标准工作溶液时，如果试样中待测物质的保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断试样中存在对应的待测物；表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度＞50％＞20％～50％＞10％～20％≤10％允许的相对偏差±20％±25％±30％±50％空白试验的方法为：除不加试样外，均按上述操作步骤进行；结果计算和表述方法：用色谱数据处理机或按下式1计算试样中待测物的含量，计算结果须扣除空白值：式1中：Xi———试样中目标化合物的含量，单位为微克每千克(μg/kg)；c———标准工作溶液中待分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；ci———样品中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；A———样品中待分析物的峰面积；Asi———标准工作溶液中内标物的峰面积；V———样品定容体积，单位为毫升(mL)；csi———标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；Ai———样品溶液中内标物的峰面积；As———标准工作溶液中待分析物的峰面积；m———样品的称样量，单位为克(g)；计算结果保留两位有效数字；线性范围和定量限的确定方法如下：在上述实验条件下，取一系列不同浓度的苯并咪唑类及其代谢物标准溶液，以苯并咪唑类及其代谢物响应峰面积与内标响应峰面积之比对苯并咪唑类及其代谢物的浓度进行线性回归，结果表明，当苯并咪唑类及其代谢物的浓度在0～1.0μg/L范围内，线性关系良好，其回归方程、相关系数见下表3；表3 回归方程、相关系数、检测限和定量限在本方法的测定条件下，选择空白的乳制品样品，按照3倍信噪比计，苯并咪唑类药物及其代谢物在牛奶和奶粉样品中的检出限分别见表3；按照10倍信噪比计，苯并咪唑类药物及其代谢物在牛奶和奶粉样品中的定量限分别见表3；当样品中的苯并咪唑类及其代谢物浓度超过此线性范围时，可适当加大样品的稀释倍数；方法的回收率和精密度：选用未含有苯并咪唑类及其代谢物的样品基质分别进行添加回收率和精密度实验，液态奶的添加水平为1.0、2.0、10.0μg/kg，奶粉的添加水平为5.0、10.0、50.0μg/kg，先对样品进行提取和净化，每个添加水平重复测定6次，计算添加回收率；回收率和精密度结果见下表4；三个添加水平的平均回收率在81.4％～108.2％之间，相对标准偏差为0.4％～9.3％；表明本方法回收率稳定，可满足实际样品的检测要求；表4 乳制品中苯并咪唑类及其代谢物的加标回收率与精密度(n＝6)