[发明专利]一种烷烃和多环芳烃降解复合菌剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种烷烃和多环芳烃降解复合菌剂及其制备方法。通过使用专用培养基对烷烃降解菌株台式戈登氏菌NR_61和多环芳烃降解菌株施氏假单胞菌ZJ‑7分别发酵；澄清型碟式离心机离心后获得菌体细胞；按比例在菌体细胞中依次加入糊精、高岭土、(NH4)2HPO4、十二烷基磺酸钠后，获得的白色固体制剂即目的产品。本发明中的高效、环境友好的烷烃和多环芳烃降解复合菌剂对污染土壤中烷烃的降解率可达75%以上，多环芳烃（萘和菲）的降解率可达70%以上，具有经济环保、实施成本低、操作简便等优点。

主权项

1.一种烷烃和多环芳烃降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：步骤一：单菌发酵(1)将液体发酵培养基A的pH值调节至7.4‑7.6，按照常规操作进行无菌处理，按液体质量8％‑10％无菌操作接入台式戈登氏菌NR_61，恒温25±1℃，搅拌速度280‑320rpm，通风量0.3‑0.5M3/min，罐压0.070‑0.085MPa，持续发酵75‑82h后，通过血球计数板进行活菌计数，菌数达到1.0×108个/mL以上时终止发酵，所述液体发酵培养基A的配方如下：蔗糖15‑20g/L、蛋白胨1.8‑2.0g/L、Na2HPO4 1.5‑2.0g/L、KH2PO4 3.5‑3.8g/L、(NH4)2SO4 4.0‑4.5g/L、MgSO4·7H2O 0.7‑1.0g/L、CaCl2·2H2O 0.05‑0.10g/L、FeSO4·7H2O 0.05‑0.10g/L、柠檬酸三钠0.5～0.8g/L、余量水；(2)将液体发酵培养基B的pH值调节至7.0‑7.2，按照常规操作进行无菌处理，按液体质量5‑8％无菌操作接入施氏假单胞菌ZJ‑7，恒温35±1℃，搅拌速度250‑280rpm，通风量0.25‑0.35M3/min，罐压0.035‑0.055MPa，持续发酵68‑72h后，通过血球计数板进行活菌计数，菌数达到2.0×109个/mL以上时终止发酵，所述液体发酵培养基B的配方如下：甘油2.0‑2.4g/L、牛肉膏3.2‑3.5g/L、尿素2.2‑2.5g/L、K2HPO4 3.8‑4.2g/L、Na2HPO4 2.0‑2.5g/L、NaNO31.5‑2.5g/L、MgSO4·7H2O 0.7‑1.0g/L、(NH4)2SO4 1.0‑1.6g/L、CaCl2·2H2O 0.05‑0.10g/L、FeSO4·7H2O 0.05‑0.10g/L、酵母提取物0.5‑1.0g/L、余量水；步骤二：菌体细胞分离分别收集步骤一液体发酵培养基A的台式戈登氏菌NR_61发酵液以及液体发酵培养基B的施氏假单胞菌ZJ‑7发酵液，用澄清型碟式离心机离心除去发酵液中水分，获得橙色粘稠状台式戈登氏菌NR_61菌体细胞以及淡黄色施氏假单胞菌ZJ‑7菌体细胞；步骤三：菌剂制备。