[发明专利]一种烷烃和多环芳烃降解复合菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种烷烃和多环芳烃降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

步骤一：单菌发酵

(1)将液体发酵培养基A的pH值调节至7.4-7.6，按照常规操作进行无菌处理，按液体质量8％-10％无菌操作接入台式戈登氏菌NR_61，恒温25±1℃，搅拌速度280-320rpm，通风量0.3-0.5M³/min，罐压0.070-0.085MPa，持续发酵75-82h后，通过血球计数板进行活菌计数，菌数达到1.0×10⁸个/mL以上时终止发酵，

所述液体发酵培养基A的配方如下：蔗糖15-20g/L、蛋白胨1.8-2.0g/L、Na₂HPO₄ 1.5-2.0g/L、KH₂PO₄ 3.5-3.8g/L、(NH₄)₂SO₄ 4.0-4.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.7-1.0g/L、CaCl₂·2H₂O0.05-0.10g/L、FeSO₄·7H₂O 0.05-0.10g/L、柠檬酸三钠0.5～0.8g/L、余量水；

(2)将液体发酵培养基B的pH值调节至7.0-7.2，按照常规操作进行无菌处理，按液体质量5-8％无菌操作接入施氏假单胞菌ZJ-7，恒温35±1℃，搅拌速度250-280rpm，通风量0.25-0.35M³/min，罐压0.035-0.055MPa，持续发酵68-72h后，通过血球计数板进行活菌计数，菌数达到2.0×10⁹个/mL以上时终止发酵，

所述液体发酵培养基B的配方如下：

甘油2.0-2.4g/L、牛肉膏3.2-3.5g/L、尿素2.2-2.5g/L、K₂HPO₄ 3.8-4.2g/L、Na₂HPO₄2.0-2.5g/L、NaNO₃1.5-2.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.7-1.0g/L、(NH₄)₂SO₄ 1.0-1.6g/L、CaCl₂·2H₂O 0.05-0.10g/L、FeSO₄·7H₂O 0.05-0.10g/L、酵母提取物0.5-1.0g/L、余量水；

步骤二：菌体细胞分离

分别收集步骤一液体发酵培养基A的台式戈登氏菌NR_61发酵液以及液体发酵培养基B的施氏假单胞菌ZJ-7发酵液，用澄清型碟式离心机离心除去发酵液中水分，获得橙色粘稠状台式戈登氏菌NR_61菌体细胞以及淡黄色施氏假单胞菌ZJ-7菌体细胞；

步骤三：菌剂制备；

所述步骤一中的Gordonia terrae台式戈登氏菌NR_61于2014年11月6日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.9931；

Pseudomonas stutzeri施氏假单胞菌ZJ-7于2017年2月20日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13674；

所述步骤(三 )中将步骤二获得的两种菌体细胞，分别按照菌体与糊精质量比1:0.6-1.2的比例加入糊精然后搅拌混合均匀，再将两种菌-糊精混合物搅拌混匀，形成复合菌-糊精混合物；再按照菌体:高岭土质量比1:2.0-4.0的比例加入细度为100目高岭土，搅拌混合均匀；最后按照菌体：(NH₄)₂HPO₄质量比1:0.2-1.5的比例加入(NH₄)₂HPO₄，按照菌体：十二烷基磺酸钠质量比1:0.1-1.0的比例加入十二烷基磺酸钠，搅拌混合均匀，获得白色烷烃和多环芳烃降解复合菌剂。

2.如权利要求1所述的烷烃和多环芳烃降解复合菌剂的制备方法制得的烷烃和多环芳烃降解复合菌剂。