[发明专利]一种人造角膜的制备方法及应用

摘要

本发明提供一种人造角膜的制备方法及应用，本发明方法是将角膜在体外进行分离，将上皮细胞和角膜内皮细胞分离出来，之后分别进行角膜上皮细胞和角膜内皮细胞的体外扩增培养；待角膜上皮细胞和角膜内皮细胞传到第3代时进行人造角膜的制备；利用第3代角膜上皮细胞制备人造角膜上皮细胞层、前弹力层和基质层。利用第3代角膜内皮细胞做内皮细胞制备人造角膜后弹力层与内皮细胞层的培养；然后将上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层和内皮细胞层，一起制备成人造角膜。本发明人造角膜的制备方法是根据角膜结构形成过程制备的，其功能与受体角膜一致。且不会发生免疫排斥，适用性强。

主权项

1.一种人造角膜的制备方法，其特征是，将角膜在体外进行分离，将上皮细胞和角膜内皮细胞分离出来，之后分别进行角膜上皮细胞和角膜内皮细胞的体外扩增培养；待角膜上皮细胞和角膜内皮细胞传到第3代时进行人造角膜的制备；所述人造角膜的制备步骤包括：人造角膜上皮细胞层、前弹力层和基质层的培养：利用第3代角膜上皮细胞做上皮细胞单片层，将6片角膜细胞单层片叠放在一起，形成上皮细胞层，然后加入Ⅰ型胶原纤维诱导因子培养形成前弹力层；前弹力层用角化介质培养基继续培养，并加入角膜上皮细胞，培养形成角膜基质层；人造角膜后弹力层与内皮细胞层的培养：利用第3代角膜内皮细胞做内皮细胞单片层，用含有血清和胶原纤维诱导因子α的DF‑K培养基，诱导培养生成胶原纤维构成后弹力层；将形成的后弹力层与角膜内皮细胞层转膜，转至上皮细胞层、前弹力层和基质层这前三层膜上，使组织结构由下至上依次是上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层和内皮细胞层，细胞培养箱中继续培养3天；人造角膜的透明培养：3天后换成含钙K‑SFM培养基对人造角膜进行透明培养，培养4天后便在体外形成完整的人造角膜。