[发明专利]人工肺泡的制备方法

摘要

本发明公开了一种人工肺泡的制备方法。所述方法先将明胶水溶液通过微流控装置制备直径均一的明胶微球，通过自组装方法获得规则排列的明胶支架，加热使其紧密排列后灌注PU溶液，经冷冻干燥去除溶剂后，水浴法除去明胶模板，获得具有反蛋白石结构的三维多孔PU支架。然后将PU支架进行氨等离子体处理接枝氨基，通过EDC/NHS将肝素连接到氨基上，再加入VEGF，使VEGF结合于肝素上。最后将MRC‑5细胞旋转接种于VEGF修饰的PU支架上，按比例接种HUVECs和NL20细胞的混合细胞悬液，共培养后制得组织工程人工肺泡。本发明通过调控明胶溶液和聚氨酯浓度、水相和有机相的流速及通道直径，自组装温度和时间，有效调控制得的人工肺泡的直径在300微米左右。

主权项

1.人工肺泡的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1，配制浓度为3～10wt/v％的明胶溶液，采用微流控技术制备明胶微球，将明胶微球置于模具中，自组装排列粘结成型后得到明胶模板；步骤2，将明胶模板浸渍在浓度为10～20wt/v％的聚氨酯的1,4‑二氧六环溶液中，置于‑20℃冷却，冷冻干燥后除去1,4‑二氧六环，得到明胶/PU复合物；步骤3，将明胶/PU复合物置于≥45℃水浴下，搅拌溶解去除明胶微球，得到PU三维多孔反蛋白石结构支架；步骤4，将PU三维多孔反蛋白石结构支架进行氨等离子体处理，75％酒精浸泡，干燥后置于1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐、N‑羟基硫代琥珀酰亚胺和肝素的混合溶液中，室温下孵育，PBS清洗后，再浸泡在VEGF溶液中，4℃下孵育，得到PU‑VEGF支架；步骤5，10‑40rpm转速下，将人胚肺细胞悬液旋转接种至PU‑VEGF支架上，然后将人脐静脉内皮细胞与人支气管上皮细胞悬液接种至已接种人胚肺细胞的PU‑VEGF支架上，培养至少3周，得到人工肺泡。