[发明专利]一种提高茄子病毒诱导基因沉默效率的方法在审
| 申请号： | 201810271753.4 | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108624617A | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 刘军;周晓慧;杨艳;鲍生有;庄勇 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 210014*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高茄子病毒诱导基因沉默效率的方法，属于植物基因工程技术领域。本发明综合考虑了影响茄子VIGS沉默效率的多方面因素，通过构建含有目的基因片段的TRV2病毒沉默重组载体，采用真空渗透的方法侵染萌芽期种子，诱导内源目的基因发生沉默。该方法处理的沉默植株表型出现速度快、效率高，表型变化持续时间长，且克服了注射接种对植株伤害和茄子子叶较小注射接种困难等问题，为快速验证基因功能提供了有效的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 茄子 沉默效率 病毒诱导基因 目的基因 注射接种 植物基因工程技术 表型变化 功能提供 验证基因 真空渗透 植株表型 重组载体 综合考虑 植株 萌芽期 构建 内源 侵染 子叶 诱导 病毒 伤害 | ||
【主权项】：
1.一种提高茄子病毒诱导基因沉默效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)茄子病毒基因重组表达载体的构建；(2)适宜侵染萌芽期种子制备：利用1‰赤霉素浸种12h后，28℃催芽直到种子露白后2～3d，芽长0.5～1cm时备用；(3)侵染液的制备；(4)侵染液接种：利用真空渗透方法侵染接种茄子萌芽期种子：真空侵染系统由真空干燥器和便携式真空泵组成，抽真空渗透压强为‑25kpa，抽气时间为2min；(5)接种后培养：接种后先放入20℃人工气候箱中暗培养至破土后再转入正常培养，培养环境为25℃条件下光照16h，20℃条件下黑暗8h，相对湿度在50％～60％；(6)诱导茄子病毒基因沉默的表型观察与检测。
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