[发明专利]一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法有效
| 申请号： | 201810261745.1 | 申请日： | 2018-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN108486049B | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 田红青 | 申请（专利权）人： | 吉林奥唯姿生物医学工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京卓特专利代理事务所(普通合伙) 11572 | 代理人： | 段宇 |
| 地址： | 130000 吉林省长春市北湖科技开发区*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法，包括如下步骤：(1)将人骨髓小心叠加于等体积的淋巴细胞分离液上层，4℃条件2000r/min离心20min，吸取分离液和血浆界面云雾状的单个核细胞层，用无血清IMDM悬浮后，以1000r/min离心，按2×105/cm2密度接种于培养瓶中培养，48h后换液，将不贴壁的细胞洗去，贴壁细胞每3d换液，待细胞融合度达80％以上时，用胰酶消化传代；(2)取传代细胞以2×104/cm2的密度接种于含有无血清IMDM的培养瓶中，37℃，5％CO2培养48h后，加入miR‑196a表达抑制剂继续培养24～72h。本发明提供的方法比常规培养方法具有更高的骨髓间充质干细胞增殖率，有助于较快获得大量骨髓间充质干细胞用于干细胞移植等手术治疗。 | ||
| 搜索关键词： | 骨髓间充质干细胞 培养瓶 无血清 换液 接种 淋巴细胞分离液 传代 单个核细胞层 表达抑制剂 干细胞移植 常规培养 传代细胞 手术治疗 贴壁细胞 细胞融合 血浆界面 胰酶消化 分离液 人骨髓 云雾状 贴壁 叠加 悬浮 上层 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）骨髓间充质干细胞的分离培养：将人骨髓小心叠加于等体积的淋巴细胞分离液上层，4℃条件2000r/min离心20min，吸取分离液和血浆界面云雾状的单个核细胞层，用无血清IMDM悬浮后，以1000r/min离心，按2×105/cm2密度接种于培养瓶中培养，48h后换液，将不贴壁的细胞洗去，贴壁细胞每3d换液，待细胞融合度达80%以上时，用胰酶消化传代；（2）骨髓间充质干细胞的诱导增殖：取传代细胞以2×104/cm2的密度接种于含有无血清IMDM的培养瓶中，37℃，5% CO2培养48h后，加入miR‑196a表达抑制剂继续培养24~72h；所述miR‑196a表达抑制剂为掌叶半夏碱D。
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