[发明专利]一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法

说明书

本发明公开了一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法，包括如下步骤：(1)将人骨髓小心叠加于等体积的淋巴细胞分离液上层，4℃条件2000r/min离心20min，吸取分离液和血浆界面云雾状的单个核细胞层，用无血清IMDM悬浮后，以1000r/min离心，按2×10⁵/cm²密度接种于培养瓶中培养，48h后换液，将不贴壁的细胞洗去，贴壁细胞每3d换液，待细胞融合度达80％以上时，用胰酶消化传代；(2)取传代细胞以2×10⁴/cm²的密度接种于含有无血清IMDM的培养瓶中，37℃，5％CO₂培养48h后，加入miR‑196a表达抑制剂继续培养24～72h。本发明提供的方法比常规培养方法具有更高的骨髓间充质干细胞增殖率，有助于较快获得大量骨髓间充质干细胞用于干细胞移植等手术治疗。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法。

背景技术

骨髓间充质干细胞来源方便，能在体外培养、增殖，可分化为多种细胞，且可分泌多种营养因子和调节免疫等功能，故可成为临床疾病的辅助治疗手段。

研究表明，miR-196a可抑制骨髓间充质干细胞的增殖，抑制miR-196a的表达可以促进骨髓间充质干细胞的增殖(参考文献：MicroRNA-196a通过HOXB7调控人骨髓间充质干细胞的增殖功能，中国病理生理杂志，2014年30卷第2期，278-285)。

因此，若在培养骨髓间充质干细胞时添加适量miR-196a表达抑制剂，可提高骨髓间充质干细胞增殖率，以大量获得骨髓间充质干细胞。

发明内容

本发明目的在于提供一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法。

上述目的通过如下技术方案实现：

一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法，包括如下步骤：

(1)骨髓间充质干细胞的分离培养：将人骨髓小心叠加于等体积的淋巴细胞分离液上层，4℃条件2000r/min离心20min，吸取分离液和血浆界面云雾状的单个核细胞层，用无血清IMDM悬浮后，以1000r/min离心，按2×10⁵/cm²密度接种于培养瓶中培养，48h后换液，将不贴壁的细胞洗去，贴壁细胞每3d换液，待细胞融合度达80％以上时，用胰酶消化传代；

(2)骨髓间充质干细胞的诱导增殖：取传代细胞以2×10⁴/cm²的密度接种于含有无血清IMDM的培养瓶中，37℃，5％CO₂培养48h后，加入miR-196a表达抑制剂继续培养24～72h。

优选地，所述miR-196a表达抑制剂为掌叶半夏碱D。

优选地，取第3～5代传代细胞用于诱导增殖。

一种促进骨髓间充质干细胞增殖的IMDM培养基，添加有miR-196a表达抑制剂。

优选地，miR-196a表达抑制剂为掌叶半夏碱D。

本发明提供的方法比常规培养方法具有更高的骨髓间充质干细胞增殖率，有助于较快获得大量骨髓间充质干细胞用于干细胞移植等手术治疗。

附图说明

图1为各组骨髓间充质干细胞增殖率(％)及miR-196a相对表达水平。

具体实施方式

下面结合具体实施例介绍本发明的技术方案。下述实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，无特别要求，都是本领域技术人员容易获得的常规材料。

一、实验材料