[发明专利]一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法有效
| 申请号： | 201810261745.1 | 申请日： | 2018-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN108486049B | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 田红青 | 申请（专利权）人： | 吉林奥唯姿生物医学工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京卓特专利代理事务所(普通合伙) 11572 | 代理人： | 段宇 |
| 地址： | 130000 吉林省长春市北湖科技开发区*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 骨髓间充质干细胞 培养瓶 无血清 换液 接种 淋巴细胞分离液 传代 单个核细胞层 表达抑制剂 干细胞移植 常规培养 传代细胞 手术治疗 贴壁细胞 细胞融合 血浆界面 胰酶消化 分离液 人骨髓 云雾状 贴壁 叠加 悬浮 上层 细胞 | ||
【权利要求书】：
1.一种提高骨髓间充质干细胞增殖率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）骨髓间充质干细胞的分离培养：将人骨髓小心叠加于等体积的淋巴细胞分离液上层，4℃条件2000r/min离心20min，吸取分离液和血浆界面云雾状的单个核细胞层，用无血清IMDM悬浮后，以1000r/min离心，按2×105/cm2密度接种于培养瓶中培养，48h后换液，将不贴壁的细胞洗去，贴壁细胞每3d换液，待细胞融合度达80%以上时，用胰酶消化传代；
（2）骨髓间充质干细胞的诱导增殖：取传代细胞以2×104/cm2的密度接种于含有无血清IMDM的培养瓶中，37℃，5% CO2培养48h后，加入miR-196a表达抑制剂继续培养24~72h；
所述miR-196a表达抑制剂为掌叶半夏碱D。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：取第3~5代传代细胞用于诱导增殖。
3.一种促进骨髓间充质干细胞增殖的培养基，其特征在于：在IMDM培养基中添加miR-196a表达抑制剂得到，该miR-196a表达抑制剂为掌叶半夏碱D。
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