[发明专利]一种新的A/T到G/C碱基定点转换的基因编辑系统有效
| 申请号： | 201810142547.3 | 申请日： | 2018-02-11 |
| 公开（公告）号： | CN109306361B | 公开（公告）日： | 2022-06-28 |
| 发明（设计）人： | 李大力;张晓辉;谢玲;刘明耀 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学;上海邦耀生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;徐迅 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种新的A/T到G/C碱基定点转换的基因编辑系统，具体地，本发明提供了一种在细胞内进行基因定点替换的方法，本发明的方法可高效可识别特定的PAM，并特定的位置实现单个碱基A/T到G/C基因组的高效的定点替换。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 碱基 定点 转换 基因 编辑 系统 | ||
【主权项】：
1.一种在细胞内进行基因定点替换的方法，其特征在于，包括步骤：(i)提供一细胞以及第一载体和第二载体，其中所述第一载体含有第一核酸构建物，所述第二载体含有表达sgRNA的表达盒，其中，所述第一核苷酸具有5’‑3’(5’至3’)的式I结构：P1‑X1‑L1‑X2‑X3 (I)；其中，P1为第一启动子序列；X1为腺嘌呤脱氨酶的编码序列；L1为无或连接序列；X2为突变型Cas9核酸酶的编码序列，所述的Cas9核酸酶是无切割活性或单链切割活性的；X3为polyA序列；并且，各“‑”独立地为键或核苷酸连接序列；所述表达sgRNA的表达盒中的sgRNA为NGAN型sgRNA或NNNRRT型sgRNA，并且所述sgRNA的第7、8和/或9位对应于预定发生高效A→G定点突变的位置(即为A)；(ii)用所述的第一载体和第二载体感染所述的细胞，从而在所述细胞内进行基因定点替换。
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