[发明专利]一种NK细胞的无血清培养方法有效
| 申请号： | 201810124169.6 | 申请日： | 2018-02-07 |
| 公开（公告）号： | CN108300694B | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 李杰;刘振云;徐华栋;王维;程丰伟 | 申请（专利权）人： | 安徽古一生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙) 34124 | 代理人： | 王志兴 |
| 地址： | 238000 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，提供了一种NK细胞的无血清培养方法，包括如下步骤：(1)从外周血分离单个核细胞，重悬于无血清培养基中，调整单个核细胞浓度，培养箱中静置培养过夜；(2)第2天，从培养液中吸出悬浮细胞，接种于细胞培养瓶，补加无血清培养基，同时添加抗CD16抗体、IL2和IL3；第4天，补加无血清培养基，添加IL2、IL3，继续培养至第6天；(3)第7天，补加无血清培养基，添加IL15、α‑半乳糖神经酰胺，继续培养至第14天；(4)离心收集NK细胞，使用流式抗体鉴定NK细胞表型。本发明的优点在于：采用无血清培养方法，通过14天的体外培养，获得90％纯度以上、扩增倍数80倍以上的NK细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 nk 细胞 血清 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种NK细胞的无血清培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外周血单个核细胞的分离从25‑35mL外周血分离单个核细胞，重悬于无血清培养基中，调整单个核细胞浓度至(1‑3)x106细胞/mL，培养箱中静置培养过夜；(2)NK细胞的分离培养第2天，从获得的培养液中吸出悬浮细胞，接种于新的细胞培养瓶中，并补加无血清培养基至45‑55mL，同时添加150‑250ng/mL抗CD16抗体、450‑550U/mL IL2和15‑25ng/mL IL3；第4天，补加无血清培养基至95‑105mL，同时添加450‑550U/mL IL2、15‑25ng/mL IL3，继续培养至第6天；(3)NK细胞的继续培养第7天，补加无血清培养基至195‑205mL，并添加45‑55ng/mL IL15、95‑105ng/mL NK细胞激活剂α‑半乳糖神经酰胺，继续培养至第14天；(4)离心收集NK细胞第14天，离心收集NK细胞，使用流式抗体鉴定NK细胞表型。
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