[发明专利]一种海洋低温γ-内酰胺酶生产(-)γ-内酰胺的方法

摘要

本发明公开了一种海洋低温γ‑内酰胺酶生产(‑)γ‑内酰胺的方法，包括以下步骤：步骤1，微生物发酵产低温γ‑内酰胺酶；步骤2，获得粗酶液；步骤3，酶液浓缩；步骤4，生产(‑)γ‑内酰胺。本发明首次提出用一种海洋低温γ‑内酰胺酶生产(‑)γ‑内酰胺的方法，该方法中产酶培养基成本低廉，生产周期短；浓缩酶液所用材料可重复再利用，操作过程简单，酶活回收率高；降解过程中采取了防止染菌措施，实现了以低价值的(±)γ‑内酰胺为原料高效率迅速生产具有高医疗价值(‑)γ‑内酰胺的目的，具有显著的经济效益和社会效益。

主权项

1.一种海洋低温γ‑内酰胺酶生产(‑)γ‑内酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，微生物发酵产低温γ‑内酰胺酶选产低温γ‑内酰胺酶的菌株作为种子，接种到培养基，在26℃、150r/min培养得种子液，再以体积分数2.0％～8.0％接种量接入装有产酶发酵培养基的发酵罐，装液量15％～35％，培养温度25℃～32℃，转速为110～180rpm，通气量1vvm～3vvm，初始pH5.0～9.0，发酵20～60h后收集发酵液；步骤2，粗酶液的获得将步骤1获得的发酵液低温高速离心，分离菌体，收集菌体，得到的湿菌体经磷酸钠缓冲液(0.05mol/L，pH 7.0)洗涤3次，将菌体悬于磷酸钠缓冲液中(0.05mol/L，pH 7.0)，进行细胞破碎，破碎后10000rpm离心，取上清液为粗酶液，低温储存，备用；步骤3，酶液浓缩将步骤2所得的低温γ‑内酰胺酶粗酶液，低温透析浓缩得到浓缩酶液，浓缩时使用10kD离心超滤管；测粗酶液和浓缩酶液酶活，计算回收率；步骤4，生产(‑)γ‑内酰胺利用步骤3中获得的浓缩酶液无菌转化(±)γ‑内酰胺；其中，转化体系的温度为24℃～35℃，搅拌速度为150rpm，转化24～60h，并向转化体系中加入抗生素，得到的(‑)γ‑内酰胺用液相法检测浓度。