[发明专利]一种海洋低温γ-内酰胺酶生产(-)γ-内酰胺的方法

权利要求书

1.一种海洋低温γ-内酰胺酶生产(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，微生物发酵产低温γ-内酰胺酶

选产低温γ-内酰胺酶的菌株作为种子，接种到培养基，在26℃、150r/min培养得种子液，再以体积分数2.0％～8.0％接种量接入装有产酶发酵培养基的发酵罐，装液量15％～35％，培养温度25℃～32℃，转速为110～180rpm，通气量1vvm～3vvm，初始pH5.0～9.0，发酵20～60h后收集发酵液；

步骤2，粗酶液的获得

将步骤1获得的发酵液低温高速离心，分离菌体，收集菌体，得到的湿菌体经磷酸钠缓冲液(0.05mol/L，pH 7.0)洗涤3次，将菌体悬于磷酸钠缓冲液中(0.05mol/L，pH 7.0)，进行细胞破碎，破碎后10000rpm离心，取上清液为粗酶液，低温储存，备用；

步骤3，酶液浓缩

将步骤2所得的低温γ-内酰胺酶粗酶液，低温透析浓缩得到浓缩酶液，浓缩时使用10kD离心超滤管；测粗酶液和浓缩酶液酶活，计算回收率；

步骤4，生产(-)γ-内酰胺

利用步骤3中获得的浓缩酶液无菌转化(±)γ-内酰胺；其中，转化体系的温度为24℃～35℃，搅拌速度为150rpm，转化24～60h，并向转化体系中加入抗生素，得到的(-)γ-内酰胺用液相法检测浓度。

2.如权利要求1所述的酶法降解(±)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，所述的产低温γ-内酰胺酶的菌株为Bacillus sp.DL-8。

3.如权利要求1所述的酶法降解(±)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，步骤1中所述培养基为酵母膏0.5％，葡萄糖0.5％，KH₂PO₄ 0.7％，Na₂HPO₄ 0.2％，MgSO₄0.04％，FeSO₄ 0.002％，CaCl₂ 0.002％，NH₄Cl 0.5％，调节pH7.0。

4.如权利要求1所述的酶法降解(±)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，步骤1所述产酶发酵培养基为葡萄糖0.4％，蛋白胨1.0％，Tween-80 0.1％，KH₂PO₄0.7％，Na₂HPO₄ 0.15％，Mg₂SO₄ 0.04％，pH7.63。

5.如权利要求1所述的酶法降解(±)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，步骤2中低温高速离心为4℃、12000rpm离心。

6.根据权利要求1所述的酶法降解(±)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，步骤3中浓缩温度为4℃，10000r/min离心30min。

7.根据权利要求1所述的酶法降解(±)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，步骤4中加入的抗生素占转化体系体积分数的0.1％～0.2％；所用抗生素为卡纳或四环素。