[发明专利]改善的光-发射分子

摘要

本发明公开的是具有改善的光‑发射活性的萤光素酶多肽和它们的编码核酸。这些分子有用于一系列测定包括基于萤光素酶的基因报告子测定，生物发光共振能量转移测定，蛋白互补测定和将萤光素酶用作可检测的和/或可定量的标记物的其他应用。也公开的是增加萤光素酶‑催化的反应的灵敏度和/或改善萤光素酶‑催化的反应的动力学以及降低不期望的变量的影响的方法和组合物。

主权项

1.制备修饰的挠足虫萤光素酶多肽的方法，其包括修饰SEQ ID NO:792、170、172、790、810、2、4、6、8、10、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814的氨基酸序列、或者其缺少有功能的信号肽或无信号肽的氨基酸序列，所述修饰包括选自下列的至少一个修饰：(a)下列中的至少一个：(i)选自下列的基序：在C6的RCE、KCA或KCE，在C6的RCEE或KCEE，在C6的RCED、KCAD或KCED，在C6和/或C10的ERC，在C6的RC或KC，在C10的GRC，在C5、C6和/或C10的RCA，在C6的RCAE或KCAE，在C5和/或C6的RCAD或RCAT，及在C9的KCSD，其中C5、C6、C9和C10是共有序列SEQ ID NO:905的保守的半胱氨酸；且其中A是丙氨酸，R是精氨酸，E是谷氨酸，D是天冬氨酸，G是甘氨酸，S是丝氨酸，T是苏氨酸，且K是赖氨酸；(ii)下列氨基酸序列的全体缺失：当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列SEQ ID NO:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当待修饰的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列SEQ ID NO:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列；(iii)当待修饰的氨基酸序列是SEQ ID NO:792、170、172、790、810、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814时，在至少一个对应于共有序列SEQ ID NO:905的第85或98位的位置的L；及当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，任选地还包括使信号肽序列失去功能或删除信号肽的修饰；或者(b)选自下列的基序：在C10的ERC，在C5的RCA，在C5和/或C6的RCAD，及在C9的KCSD，其中C5、C6、C9和C10是共有序列SEQ ID NO:905的保守的半胱氨酸；以及任选地还包括下列氨基酸序列的全体缺失：当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列SEQ ID NO:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当待修饰的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列SEQ ID NO:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，及当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，任选地还包括使信号肽序列失去功能或删除信号肽的修饰，由此产生修饰的挠足虫萤光素酶多肽。