[发明专利]一种纳米纤维固定化酶载体的制备及应用在审
| 申请号： | 201810071779.4 | 申请日： | 2018-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN108588103A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 张博涵;黄和;唐苏苏;徐晴;沈新乐;胡燚;江凌 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C12N11/10;B82Y40/00 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 蔡吉;徐蓓 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种纳米纤维固定化酶载体的制备方法及应用，涉及基因工程、酶工程技术领域。通过将载体结合蛋白与curli纤维蛋白基因融合，克隆到大肠杆菌体内进行表达，获得改造的curli纳米纤维。改造后curli纳米纤维上自身的载体蛋白可特异性识别载体结合蛋白将目的酶蛋白定向锚定在curli纤维上，获得固定化酶。本发明的优点是该固定化酶载体原料易得、成本低廉、制备过程简单、强度高、通用性高、比表面积大、与酶亲合力强。 | ||
| 搜索关键词： | 纳米纤维 固定化酶载体 载体结合 制备 蛋白 纤维蛋白基因 大肠杆菌 酶工程技术 特异性识别 固定化酶 基因工程 载体蛋白 制备过程 酶蛋白 亲合力 锚定 应用 改造 克隆 纤维 体内 融合 | ||
【主权项】：
1.一种纳米纤维固定化酶载体的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)合成如SEQ1所示的CsgA基因和载体结合蛋白Tag基因的融合基因CsgA‑Tag；(2)分别使用DNA限制性内切酶对表达载体pET22b和融合基因CsgA‑Tag进行双酶切，再使用DNA连接酶对载体和片段进行连接，得到CsgA‑Tag融合基因表达载体pET22b‑CsgA‑Tag；(3)使用热激法生物纳米纤维基因表达载体转化到△csgA大肠杆菌感受态细胞中，筛选阳性克隆，得到表达CsgA‑Tag的大肠杆菌基因工程菌A；(4)将所述的大肠杆菌基因工程菌A以1％～5％接种量接种到LB液体培养基，并加入IPTG诱导表达12～24h，收集菌体，使用缓冲液洗涤，即获得改造的纳米纤维固定化酶载体。
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