[发明专利]一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，属于胃癌药物制备技术领域。本发明提供的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，是采用PTGDS过表达腺病毒转染间质干细胞后，经培养、分离纯化后获得。本发明提供的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体高效靶向胃癌细胞，抑制胃癌细胞的生长和迁移，进而抑制肿瘤生长。

主权项

1.一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体在制备预防或治疗胃癌药物中的应用，其特征在于，所述过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：1)将PTGDS过表达腺病毒转染间质干细胞，经筛选获得PTGDS过表达间质干细胞；PTGDS过表达腺病毒以10⁸的滴度进行转染；2)将所述步骤1)得到的PTGDS过表达间质干细胞接种至含胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行第一扩增培养，待细胞融合至70～80％时，采用无血清培养基进行第二扩增培养，48h后收集上清，离心去除漂浮活细胞，得到含外泌体上清；所述离心的条件为300×g离心10min；3)采用蔗糖密度梯度离心法对所述步骤2)得到的含外泌体上清进行分离纯化，得到过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体；所述分离纯化包括以下步骤：a)将所述含外泌体上清在2000×g离心10min，得到去除细胞碎片的上清；b)将所述去除细胞碎片的上清在10000×g离心30min，得到去除细胞器的上清；c)将步骤b)得到的去除细胞器的上清进行第一浓缩，得到第一浓缩液；d)将步骤c)得到的第一浓缩液移至1/4倍体积的蔗糖/重水密度垫，100000×g离心3h，收集底部的蔗糖/重水层，进行第二浓缩，得到第二浓缩液；e)将所述步骤d)得到的第二浓缩液进行洗涤，过滤除菌后得到过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体。