[发明专利]一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用，属于胃癌药物制备技术领域。本发明提供的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，是采用PTGDS过表达腺病毒转染间质干细胞后，经培养、分离纯化后获得。本发明提供的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体高效靶向胃癌细胞，抑制胃癌细胞的生长和迁移，进而抑制肿瘤生长。

技术领域

本发明涉及胃癌药物制备技术领域，具体涉及一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用。

背景技术

胃癌在全球范围内是第五大常见的恶性肿瘤，死亡率居第三位，而在我国，胃癌高居最常见癌症的第三位，已经是第二大癌症致死原因。目前临床治疗胃癌药物主要有5-氟尿嘧啶等化疗药物，这些药物能够显著地抑制肿瘤的进展，但是由于其对肿瘤组织的特异性差，而有很强的副作用。因此，我们亟待需要一种既具有抗胃癌细胞生长又具有靶向治疗作用的“生物制剂”。

PGD2是前列腺素的一种，是重要的细胞信号分子，它的合成主要通过以下的生物过程：细胞膜上的磷脂酶A转化成花生四烯酸，后者在环氧化酶(包括COX-1和COX-2)的催化下，被分解成不稳定的中间产物前列腺素H2，前列腺素H2又被三种不同的酶：前列腺素D合成酶(PGDS)，前列腺素E合成酶及前列腺素F合成酶转化为更稳定的PGD2，PGE2，PGF2。PGDS前列腺素系列的关键酶系，又包括脂质运载蛋白型PGD合成酶(L-PTGDS)和造血型PGD合成酶(H-PTGDS)。虽然现有报道公开了在肿瘤细胞中过表达PTGDS可以有效地控制体外胃癌细胞的生长，具有治疗胃癌的潜力(专利申请号：201611203449.3)，但现有技术仍缺少实际能够高效靶向治疗胃癌的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用。本发明提供的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体高效靶向胃癌细胞，抑制胃癌细胞的生长和迁移，进而抑制肿瘤生长。

本发明提供了一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，所述过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：

1)将PTGDS过表达腺病毒转染间质干细胞，经筛选获得PTGDS过表达间质干细胞；

2)将所述步骤1)得到的PTGDS过表达间质干细胞接种至含胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行第一扩增培养，待细胞融合至70～80％时，采用无血清培养基进行第二扩增培养，48h后收集上清，离心去除漂浮活细胞，得到含外泌体的上清；

3)采用蔗糖密度梯度离心法对所述步骤2)得到的含外泌体的上清进行分离纯化，得到过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体。

在本发明中，所述步骤1)中，PTGDS过表达腺病毒以10⁸的滴度进行转染。

在本发明中，步骤2)所述含胎牛血清的低糖DMEM培养基中含质量浓度为10％的胎牛血清。

优选的是，步骤2)所述离心的条件为300×g离心10min。

优选的是，步骤3)所述分离纯化包括以下步骤：

a)将所述含外泌体上清在2000×g离心10min，得到去除细胞碎片的上清；

b)将所述去除细胞碎片的上清在10000×g离心30min，得到去除细胞器的上清；

c)将步骤b)得到的去除细胞器的上清进行第一浓缩，得到第一浓缩液；

d)将步骤c)得到的第一浓缩液移至1/4倍体积的蔗糖/重水密度垫，100000×g离心3h，收集底部的蔗糖/重水层，进行第二浓缩，得到第二浓缩液；

e)将所述步骤d)得到的第二浓缩液进行洗涤，过滤除菌后得到过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体。