[发明专利]一种制备HPV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的方法

摘要

本发明公开了一种制备HPV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的方法。具体地，本发明公开了HLA‑A2402限制性抗HPV抗原特异性CTL的制备方法。该方法通过单采或静脉采血收集外周血单个核细胞，用CpG ODN 2395增强B细胞的抗原提呈功能，用负载HLA‑A2402限制性HPV抗原肽的B细胞刺激外周血单个核细胞，并用rhIL‑2、rhIL‑7、rhIL‑15、rhIL‑21联合促进T细胞生长。本方法制备的目标CTL具有制备简单、制备周期短、成本低、高增殖能力、高杀伤活性、高细胞活率等特点，可用于HPV感染相关疾病包括宫颈癌的免疫治疗。

主权项

1.一种制备抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的方法，其包括：a)从受试者获得血液，并分离外周血单个核细胞；b)采用细胞培养基将a)中获得的外周血单个核细胞调整至密度为1×106个/mL至3×106个/mL；c)向b)中获得的外周血单个核细胞的培养物中加入终浓度为10‑50μg/mL的CpG ODN，并加入终浓度为10‑50μg/mL的抗原或抗原肽，以刺激B细胞与抗原递呈；d)将c)中获得的经刺激的外周血单个核细胞的培养物加入到培养器皿中，在适合细胞生长的条件下进行培养；e)在d)中培养2‑4天后，向培养器皿中加入无血清培养基，所述无血清培养基中含有rhIL‑2、rhIL‑7、rhIL‑15和rhIL‑21，加入培养器皿后，各自的终浓度为：rhIL‑2：200‑1000IU/mL；rhIL‑7：50‑100ng/mL；rhIL‑15：50‑100ng/mL；rhIL‑21：50‑100ng/mL，并在适合细胞生长的条件下继续培养；f)继续培养2‑4天后，向培养器皿中加入无血清培养基，所述无血清培养基中含有rhIL‑2、rhIL‑7、rhIL‑15和rhIL‑21，加入培养器皿后，各自的终浓度为：rhIL‑2：200‑1000IU/mL；rhIL‑7：50‑100ng/mL；rhIL‑15：50‑100ng/mL；rhIL‑21：50‑100ng/mL，在适合细胞生长的条件下继续培养；g)重复f)1‑10次，获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞。