[发明专利]重组牛抵抗素蛋白及其制备方法在审
| 申请号： | 201810033929.2 | 申请日： | 2018-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN108315341A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 左之才;阳明贤;岑垚;马志宇;姚彩霞;沈留红;邓俊良;马晓平;余树民;苟丽萍 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/575 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种重组牛抵抗素蛋白及其制备方法。针对现有制备牛抵抗素蛋白的方法表达的蛋白所含标签过大，容易造成蛋白构象的改变，不利于活性研究等问题，本发明提供了一种重组牛抵抗素蛋白的制备方法，包括以下步骤：RT‑PCR方法扩增出牛抵抗素基因，构建pET21a‑RETN载体，转化至大肠杆菌，经选择性培养、PCR检测、双酶切鉴定、基因测序，选择带有目的性基因的质粒；再将pET21a‑RETN载体转化至大肠杆菌BL21、Rosetta，诱导表达牛抵抗素蛋白。本发明方法操作简单，成本低廉，表达量高，能够高效制备大量重组牛抵抗素蛋白，为一步对其生理功能的研究和应用于相关疾病的预防和治疗奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 素蛋白 抵抗 制备 大肠杆菌 生物工程领域 选择性培养 研究和应用 蛋白构象 高效制备 活性研究 基因测序 生理功能 诱导表达 载体转化 表达量 双酶切 素基因 构建 扩增 质粒 蛋白 标签 基因 疾病 治疗 预防 转化 | ||
【主权项】：
1.重组牛抵抗素蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a、根据牛抵抗素基因序列设计扩增引物；b、提取牛的总RNA，RT‑PCR得到牛抵抗素基因；c、构建pET21a‑RETN原核表达载体，转化至大肠杆菌DH5a，经选择性培养、PCR检测、双酶切鉴定、基因测序，选择带有牛抵抗素基因的菌液抽提质粒；d、将步骤c选择的质粒转化至大肠杆菌BL21或Rosetta中，经选择性培养、PCR检测、双酶切鉴定、基因测序，选择带有牛抵抗素目的条带的菌液，转接培养获得菌液，进行SDS‑PAGE、免疫印迹试验，再经镍柱过滤，纯化，得到可溶性的重组牛抵抗素蛋白。
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