[发明专利]可支持人胚胎干细胞生长的人源饲养层细胞的制备方法有效
| 申请号： | 201810030000.4 | 申请日： | 2018-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN108148864B | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 邹春林;滕夏虹;王丽惠;许倩倩;孙晓婷;卢奕;张健 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 靳浩 |
| 地址： | 530021 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种可支持人源饲养层细胞可支持人胚胎干细胞生长的人源饲养层细胞的制备方法，包括以下步骤：S1、将人骨髓间充质干细胞置于培养基中进行传代培养；S2、将含有潮霉素抗性基因的逆转录病毒颗粒感染S1中传代培养的人骨髓间充质干细胞，得到人骨髓间充质干细胞；S3、将含有Wnt3a基因和新霉素抗性基因的逆转录病毒颗粒感染人骨髓间充质干细胞，得到TW2R细胞；S4、将含有E‑cadherin基因和嘌呤霉素抗性基因的慢病毒颗粒染入TW2R细胞，得到TWE3R细胞。本发明制得的人源饲养层细胞可稳定表达E‑cadherin蛋白，而且稳定表达E‑cadherin基因后不会影响TWE3R细胞的增殖能力。 | ||
| 搜索关键词： | 支持 胚胎 干细胞 生长 饲养 细胞 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种可支持人胚胎干细胞生长的人源饲养层细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将人骨髓间充质干细胞置于MSC培养基中进行传代培养；S2、将含有hTERT基因和潮霉素抗性基因的逆转录病毒颗粒感染S1中传代培养的人骨髓间充质干细胞中，然后加入hygromycin B进行筛选，得到含有hTERT基因和潮霉素抗性基因的人骨髓间充质干细胞；S3、将含有Wnt3a基因和新霉素抗性基因的逆转录病毒颗粒感染S2中含有hTERT基因和潮霉素抗性基因的人骨髓间充质干细胞中，然后加入G418进行筛选，得到含有hTERT基因、潮霉素抗性基因、Wnt3a基因、新霉素抗性基因的TW2R细胞；S4、将含有E‑cadherin基因和嘌呤霉素抗性基因的慢病毒颗粒感染S3中TW2R细胞中，然后加入puromycin进行筛选，得到过表达E‑cadherin的TWE3R细胞，即为人源饲养层细胞。
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