[发明专利]用于个体细胞的配对mRNA捕获和测序蝶形条码的高通量油-乳液合成在审
| 申请号： | 201780050829.4 | 申请日： | 2017-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN109642254A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | J·布莱特曼;L·斯考特勒 | 申请（专利权）人： | 代表亚利桑那州立大学的亚利桑那校董会 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12N15/87 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 葛臻翼;陈扬扬 |
| 地址： | 美国亚*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明涉及将独特的蝶形条码纳入核酸折纸纳米结构的方法(图1)。特别地，本文提供了使用例如高通量下一代测序来促进来自个体细胞的核酸的配对和分析的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 个体细胞 高通量 条码 测序 蝶形 核酸 配对 纳米结构 乳液 折纸 捕获 合成 分析 | ||
【主权项】：
1.一种用于将单链DNA(ssDNA)条码化的多核苷酸纳入核酸折纸纳米结构中的方法，所述方法包括：(a)进行条码核酸的第一链合成或乳液内液滴扩增以产生双链条码核酸，其中条码核酸包含与感兴趣的基因序列的保守区域互补的区域、以及与单链5'‑5'蝶形接头核酸的一侧互补的至少一个引发位点，所述单链5'‑5'蝶形接头核酸包含中心5'‑5'磷酸二酯接头，所述中心5'‑5'磷酸二酯接头的一侧侧接有与核酸折纸纳米结构互补的序列；(b)在包含用于延伸靶核酸的试剂的油‑乳液液滴中合并双链条码核酸和5'‑5'蝶形接头核酸；(c)使包含双链条码核酸和5'‑5'蝶形接头核酸的油‑乳液液滴热循环，所述热循环足以导致双链条码核酸退火至5'‑5'蝶形接头核酸上的互补序列并延伸ssDNA条码化的5'‑5'蝶形多核苷酸，从而产生延伸液滴；(d)自延伸液滴中提取延伸产物；(e)自提取的延伸产物中纯化ssDNA条码化的5’‑5’蝶形多核苷酸；以及(f)将纯化的ssDNA条码化的5’‑5’蝶形多核苷酸纳入核酸折纸纳米结构。
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