[发明专利]一种用于防治创伤性脑损伤的组合物及其制备方法

摘要

本发明属于医药生命科学领域，涉及丁酸梭菌制剂在防治创伤性脑损伤的应用。本发明人首次揭示了丁酸梭菌对治疗创伤性脑损伤的新用途，并提供丁酸梭菌制剂的制备方法。本发明通过肠道为靶点，通过脑‑肠轴在脑内发挥神经保护作用，改善创伤性脑损伤。本发明丁酸梭菌制剂在治疗外伤性脑损伤上具有疗效好、无毒副作用，具有很好的社会经济效益，值得推广应用。 1

主权项

1.一种治疗创伤性脑损伤的丁酸梭菌制剂，其特征在于丁酸梭菌制剂的制备方法如下：

(1)种子液制备：挑取单菌落丁酸梭菌(Clostridium butyricum)WZMC1018，保藏编号为CGMCC No.9830，接种于已灭菌的MRS液体培养基中，37℃，厌氧培养24h，即得到丁酸梭菌WZMC1018种子液；

(2)发酵：将步骤(1)得到种子液按1％重量比的接种量接入已灭菌后的含有以重量百分比计的蛋白胨1‑5％、酵母提取物0.5‑5％、葡萄糖1‑10％、低聚果糖0.5‑2％、硫酸铵0.1％、磷酸二氢钾0.05‑0.3％、磷酸氢二钾0.05‑0.3％、硫酸锰0.02％、硫酸镁0.02％和氯化钙0.002％，其余为去离子水的液体培养基中，经35℃‑37℃静置厌氧发酵24h‑48h，即得到丁酸梭菌WZMC1018发酵液；

(3)收集菌体：将步骤(2)培养得到的丁酸梭菌发酵液，3,000rpm离心5～10min，去掉上清液，得到细菌泥，去离子水2～3次洗涤，制成细菌混悬液，再次用3,000rpm离心5～10min，去掉上清液体得沉淀物；

(4)洗脱去脂：将在步骤(3)中获得的沉淀物，使用乙醇进行反复溶解洗脱，10,000rpm离心15～20min，回收沉淀物，洗脱次数为2～3次，再用去离子水3～5次洗涤，3000rpm离心5～10min，得沉淀物；

(5)菌悬液制备：将步骤(4)中获得的沉淀物于无菌生理盐水或者PBS液，比浊，获得含活菌菌量浓度为1.0×10⁹CFU/mL的悬浊液，即得到丁酸梭菌制剂。

2.根据权利要求1所述的丁酸梭菌制剂，其特征在于，所述丁酸梭菌包含的总活菌数不能低于1×10⁹CFU/mL。