[发明专利]一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法

摘要

本发明涉及一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明发现壳寡糖在柠檬酸‑盐酸‑氢氧化钠缓冲溶液中与水溶性苯胺蓝缔合，在一定的浓度范围内，其吸光度值随壳寡糖含量的增加而降低，在一定浓度范围内，吸光度的降低值与壳寡糖浓度呈线性关系，以此作为壳寡糖的定量基础，建立了一种壳寡糖的定量分析方法，本方法需考虑实际样品工作曲线是否与标准品的工作曲线是否相近，其具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好，操作简便等优点，适合在实际应用中推广使用。

主权项

1.一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，其包括下述步骤：1)绘制壳寡糖的标准曲线：向10mL比色管中按先后顺序分别加入一定酸度的柠檬酸‑盐酸‑氢氧化钠缓冲液2.00mL，水溶性苯胺蓝1.50mL，一定浓度体积成梯度壳寡糖标准液使用蒸馏水定容后充分摇匀，制备得浓度成梯度的标准溶液，将其置于80℃水浴加热，反应完毕冷却30min，于紫外分光光度计上，在波长590nm处以水为参比测量吸光度ABS；其中试剂空白记为A0，含壳寡糖的溶液记为A，并计算△A＝A–A0，建立△A与壳寡糖浓度的标准曲线；2)40μg/mL的样品工作液的制备：称取一定量待检测样品的胶囊壳，使用冰醋酸溶解并将其定容得到样品储备液，用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液10mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为40μg/mL的样品工作液；3)样品中壳寡糖含量确定：取样品工作液2mL，按步骤1)检测方法进行测定，在590nm处测定其吸光度值A，并计算△A＝A–A0，将△A代入线性回归方程求得样品中壳寡糖的含量，同时做加标回收试验。