[发明专利]一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法

权利要求书

1.一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，其包括下述步骤：

1)绘制壳寡糖的标准曲线：向10mL比色管中按先后顺序分别加入一定酸度的柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液2.00mL，水溶性苯胺蓝1.50mL，一定浓度体积成梯度壳寡糖标准液使用蒸馏水定容后充分摇匀，制备得浓度成梯度的标准溶液，将其置于80℃水浴加热，反应完毕冷却30min，于紫外分光光度计上，在波长590nm处以水为参比测量吸光度ABS；其中试剂空白记为A₀，含壳寡糖的溶液记为A，并计算△A＝A–A₀，建立△A与壳寡糖浓度的标准曲线；

2)40μg/mL的样品工作液的制备：称取一定量待检测样品的胶囊壳，使用冰醋酸溶解并将其定容得到样品储备液，用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液10mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为40μg/mL的样品工作液；

3)样品中壳寡糖含量确定：

取样品工作液2mL，按步骤1)检测方法进行测定，在590nm处测定其吸光度值A，并计算△A＝A–A₀，将△A代入线性回归方程求得样品中壳寡糖的含量，同时做加标回收试验。

2.根据权利要求1所述的一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，其特征在于，所述的柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液的pH为2.00。

3.根据权利要求1所述的一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，其特征在于，步骤1)中溶液的加入顺序为首先加入柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液，其次加入水溶性苯胺蓝，再次加入壳寡糖标准溶液。

4.根据权利要求1所述的一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，其特征在于，所述80℃水浴加热时间为10min。

5.根据权利要求1所述的一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，其特征在于，冷却至室温至测定的时间为30min-50min。

6.根据权利要求1所述的一种以水溶性苯胺蓝为探针的紫外可见分光光度法测定壳寡糖含量的方法，其特征在于，步骤1)标准曲线中壳寡糖的浓度范围0.5μg/mL-12μg/mL。